KD025 (Belumosudil)

Belumosudil (KD025) regula a la baja la secreción de IL-17 e IL-21 en PBMC humanos, y conduce a la regulación a la baja de la fosforilación de STAT3, la expresión de IRF4 y RORγt en células T CD4+. [2]

También inhibe la secreción de IL-21, IL-17 e IFNγ junto con la disminución de STAT3 fosforilado y la reducción de la expresión proteica de IRF4 y BCL6 en células mononucleares de sangre periférica humana. [3]

Belumosudil (KD025) (200 mg/kg, p.o.) inhibe la actividad de ROCK en cerebro y corazón, medida por el grado de fosforilación de MYPT1. Reduce significativamente el área de defecto de perfusión y la pérdida de tejido en el hemisferio ipsilateral. [1]

En un modelo murino de artritis inducida por colágeno (CIA), este compuesto (200 mg/kg, i.p.) regula a la baja la progresión de la artritis inducida por colágeno a través de la vía mediada por Th17. [2]

Este (150 mg/kg, i.p. o p.o.) mejora eficazmente la EICH crónica en un modelo de desajuste completo del MHC de EICH crónica de sistema multiorgánico con síndrome de bronquiolitis obliterante y un modelo de desajuste menor del MHC de EICH esclerodermiforme. [3]

• Ensayos recombinantes de ROCK1 y ROCK2

  Las diluciones y reacciones del compuesto Belumosudil (KD025) se realizan en placas de poliestireno de 96 pocillos de baja unión. La filtración se realiza en placas de filtro de 96 pocillos que contienen membranas de intercambio catiónico de fosfo-celulosa hidrofílica. La actividad enzimática de las ROCK1 y ROCK2 recombinantes se mide radiométricamente en 50 μL de mezcla de reacción que contiene tampón de ensayo (50 mmol/L Tris, pH 7,5, 0,1 mmol/L de ácido etilenglicoltetraacético, 10 mmol/L de acetato de magnesio y 1 mmol/L de ditiotreitol). La reacción se incuba durante 45 min a temperatura ambiente y se detiene con 25 μL de ácido fosfórico al 3%. El péptido S6 largo fosforilado se separa del ATP [[gamma]-³³P] no reaccionado mediante filtración del contenido de la reacción inactivada a través de una placa de filtro de fosfocelulosa P30. Cada filtro se lava tres veces con 75 μL de ácido fosfórico 75 mmol/L y una vez con 30 μL de metanol al 100%. Las placas de filtro se dejan secar y se añaden 30 μL de líquido de centelleo OptiPhase 'SuperMix' a cada pocillo. El ³³Fósforo se cuantifica en un contador de centelleo I450 MicroBeta y se corrige restando la radiactividad asociada con las muestras de fondo. Los datos se analizan y se expresan como porcentaje de inhibición utilizando la fórmula ((U - B)/(C - B)) × 100, donde U es el valor desconocido, B es el promedio de los pocillos de fondo de estaurosporina y C es el promedio de los pocillos de control. El ajuste de curvas se realiza con el software GraphPad Prism utilizando un análisis de tipo ecuación de dosis-respuesta sigmoide (pendiente variable) para generar los valores de IC50. Los valores de Ki se calculan a partir de una ecuación de Ki = IC50/(1 + [S]/Km)), donde [S] y Km son la concentración de ATP y el valor de Km de ATP, respectivamente.

• Líneas celulares

  A7r5 cells

• Concentraciones

  10 µM

• Tiempo de incubación

  2 h

• Método

  Cells were treated with Belumosudil (KD025) for 2 hours.

• Modelos animales

  Young adult, aged, or type 2 diabetic mice

• Dosificaciones

  300 mg/kg

• Administración

  p.o.