BAY 1000394

BAY 1000394 inhibe la actividad quinasa de las CDKs del ciclo celular CDK1/ciclina B, CDK2/ciclina E y CDK4/ciclina D con valores de IC50 de 7, 9 y 11 nM, respectivamente. Las CDKs transcripcionales CDK9/ciclina T1 y CDK7/ciclina H/MAT1 también son inhibidas por este compuesto en un rango similar (5 y 25 nM), así como otros miembros de la familia CDK, clasificándolo como un inhibidor pan-CDK. Este químico inhibe simultáneamente la progresión del ciclo celular y la transcripción génica mediada por la ARN polimerasa II. En un panel de 214 quinasas Ser/Thr y Tyr no-CDK, se encontró que 16 quinasas adicionales son inhibidas por este inhibidor con valores de IC50 inferiores a 100 nM. Muestra una actividad inhibidora amplia y uniforme sobre la proliferación de células cancerosas con valores de IC50 entre 9 y 79 nM (media de 39 nM) para un panel de 40 líneas celulares de tumores pulmonares humanos, y valores de IC50 entre 6 y 84 nM (media de 37 nM) para un panel de 24 líneas celulares de tumores mamarios humanos e inmortalizadas. Dentro de estos paneles, que representan una amplia gama de antecedentes genéticos (p53, pRB, K-Ras, PGP, etc.), no se pudo identificar ninguna línea celular que fuera poco sensible al tratamiento con este agente. La actividad antiproliferativa del compuesto se asocia con la inducción de la muerte celular apoptótica. La exposición de células HeLa que crecen asincrónicamente a este compuesto durante 24 horas reduce la fracción de células con contenido 2N, del 69% al 52% en comparación con las células tratadas con vehículo y aumenta fuertemente la fracción de células con menos de 2N de contenido de ADN del 1% al 16%. Solo se observan cambios menores para las células en fase S, G2 o M. [1]

BAY 1000394 muestra una potente inhibición del crecimiento tumoral en monoterapia tras aplicación oral en diversas pautas de dosificación de forma dosis-dependiente, actividad en modelos de tumores refractarios al tratamiento y eficacia en modelos derivados de líneas celulares, así como en modelos derivados de tumores de pacientes. Este compuesto (2 mg/kg) suprime el crecimiento de los xenoinjertos de tumores HeLa-MaTu con valores T/C de 0,03 y signos de regresión tumoral. Muestra una eficacia aditiva en combinación con cisplatino. La adición de este químico al cisplatino resulta en una fuerte inhibición del crecimiento tumoral de los xenoinjertos de CPNPC NCI-H82 con valores T/C de 0,01 (1,0 mg/kg de este compuesto) y -0,02 (1,5 mg/kg de este compuesto). [1]

• Ensayos de quinasas

  Las proteínas de fusión recombinantes CDK1 y CycB-GST, y CDK2 y CycE-GST, se purifican de células de insecto Sf9 infectadas con baculovirus. La histona IIIS se utiliza como sustrato de quinasa. La inhibición de la actividad quinasa se determina mediante ensayos de fosforilación de sustrato utilizando trifosfato de adenosina ³P-gamma. Este compuesto se somete a cribado cruzado contra un panel de 220 quinasas utilizando el cribado Kinase profiler a 500 nM.

• Líneas celulares

  Human cervical cancer cell HeLa-MaTu

• Concentraciones

  ~10 μM

• Tiempo de incubación

  4 days

• Método

  Proliferation assays are conducted in 96 well plates at densities between 1,000 and 5,000 cells per well in the appropriate medium containing 10% fetal calf serum (FCS). Cells are treated in quadruplicates with serial dilutions of BAY 1000394 for 96 hours followed by quantification of relative cell numbers upon crystal violet staining. This compound is profiled on panels of 40 human lung and 24 human breast cell lines using the Oncology Profiling Service.