Bardoxolone Methyl (RTA 402)

El Bardoxolone Methyl exhibe potentes actividades inhibitorias contra la producción de óxido nítrico inducida por interferón-Ƴ en macrófagos de ratón con una IC50 de 0.1 nM. [1] Este compuesto disminuye la viabilidad de las células leucémicas HL-60, KG-1 y NB4 con una IC50 de 0.4, 0.4 y 0.27 μM, respectivamente. Induce la proteína pro-apoptótica Bax, inhibe la activación de ERK1/2 y bloquea la fosforilación de Bcl-2, lo que contribuye a la inducción de la apoptosis. [2] Este químico inhibe potentemente la NF-kappaB constitutiva e inducible activada por TNF, interleucina (IL)-1beta, éster de forbol, ácido okadaico, peróxido de hidrógeno, lipopolisacárido y humo de cigarrillo. [3]

El Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) reduce el número, tamaño y gravedad de los tumores pulmonares in vivo. [4] Este compuesto reduce significativamente la respuesta de citoquinas inflamatorias in vivo después del desafío con LPS, induce la expresión de la proteína HO-1 en el bazo y protege a los ratones contra una dosis letal de LPS. [5]

• Ensayo de IKK

  Para determinar el efecto de CDDO-Me en la activación de IKK inducida por TNF, se analiza IKK. Brevemente, el complejo IKK de extractos de células enteras se precipitó con un anticuerpo contra IKKα e IKKβ y luego se trató con perlas de proteína A/G-Sepharose. Después de 2 horas, las perlas se lavan con tampón de lisis y luego se resuspenden en una mezcla de ensayo de quinasa que contiene 50 mmol/L HEPES (pH 7.4), 20 mmol/L MgCl₂, 2 mmol/L DTT, 20 μCi [γ-³²P]ATP, 10 μmol/L ATP no marcado y 2 μg del sustrato glutatión S-transferasa-IκBα (aminoácidos 1-54). Después de la incubación a 30°C durante 30 minutos, la reacción se termina hirviendo con tampón de muestra SDS durante 5 minutos. Finalmente, la proteína se resuelve en SDS-PAGE al 10%, el gel se seca y las bandas radiactivas se visualizan con un Storm820. Para determinar las cantidades totales de IKK-α e IKK-β en cada muestra, 50 μg de proteínas de células enteras se resuelven en SDS-PAGE al 7.5%, se transfieren electroforéticamente a una membrana de nitrocelulosa y luego se blotean con anticuerpos anti-IKK-α o anti-IKK-β.

• Líneas celulares

  HL-60, KG-1, and NB4 cells

• Concentraciones

  ~5 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Leukemic cell lines are cultured at a density of 3.0 × 10⁵ cells/mL, and AML mononuclear cells are cultured at 5 × 10⁵ cells/mL in the presence or absence of indicated concentrations of this compound. Appropriate amounts of DMSO (final concentration less than 0.05%) are included as control. For cytotoxicity studies, 1 μM ara-C is added to the cultures. After 24 to 72 hours, viable cells are counted with the trypan blue dye exclusion method using a hematocytometer.

• Modelos animales

  Female A/J mice are injected i.p. with vinyl carbamate.

• Dosificaciones

  ~60 mg/kg

• Administración

  Oral gavage