AZD6482

N.º de catálogoS1462 Lote:S146202

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₂H₂₄N₄O₄

Peso molecular

408.45

Número CAS

1173900-33-8

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

82 mg/mL (200.75 mM)

Ethanol

10 mg/mL (24.48 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	30.000mg/ml (73.45mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

AZD6482 (KIN-193) es un inhibidor de PI3Kβ con un IC50 de 10 nM, 8, 87 y 109 veces más selectivo para PI3Kβ que para PI3Kδ, PI3Kα y PI3Kγ en ensayos sin células. Fase 1.

Objetivos

PI3Kβ (Cell-free assay)	PI3Kδ (Cell-free assay)	DNA-PK (Cell-free assay)	PI3Kα (Cell-free assay)
10 nM	80 nM	420 nM	870 nM

In vitro

AZD6482 también inhibe PI3Kα, γ y δ, con un IC50 de 80 nM a 1,09 μM, que son significativamente más bajos que su (+)-enantiómero (forma S). Este compuesto es un agente antiplaquetario; bloquea la activación/agregación plaquetaria y promueve la desagregación plaquetaria en el ensayo de agregación plaquetaria lavada (WPA), con un valor de IC50 de 6 nM. Además, al dirigirse a PI3Kβ, este químico inhibe específicamente la trombosis sin interferir con la hemostasia normal. Por lo tanto, se utiliza como un fármaco antitrombótico para la profilaxis de trastornos trombóticos.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayo de inhibición enzimática de PI3K La inhibición de PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ y PI3Kδ se evalúa en un ensayo de actividad enzimática basado en AlphaScreen utilizando enzimas recombinantes humanas. El ensayo mide la conversión de PIP2 a PIP3 mediada por PI3K. El PIP3 biotinilado, un dominio de homología de pleckstrina (PH) marcado con GST y las dos perlas AlphaScreen forman un complejo que emite una señal tras la excitación con láser a 680 nm. El PIP3 formado en la reacción enzimática compite con el PIP3 biotinilado por la unión al dominio PH, reduciendo así la señal con el aumento del producto enzimático. Este compuesto se disuelve en DMSO y se añade a placas de 384 pocillos. PBKβ, PBKα, PBKγ o PBKδ se añade en un tampón Tris (50 mM Tris pH 7,6, 0,05 % CHAPS, 5 mM DTT y 24 mM MgCl₂) y se deja preincubar con este producto químico durante 20 minutos antes de la adición de la solución de sustrato que contiene PIP2 y ATP. La reacción enzimática se detiene después de 20 minutos mediante la adición de una solución de parada que contiene EDTA y biotina-PIP3, seguida de la adición de una solución de detección que contiene GST-grpl PH y perlas AlphaScreen. Las placas se dejan durante un mínimo de 5 horas en la oscuridad antes del análisis. La concentración final de DMSO, ATP y PIP2 en el ensayo son, respectivamente, 0,8 %, 4 μM y 40 μM. Los valores de IC50 se calculan según la ecuación, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, donde y = % de inhibición; a = 0 %; b = 100 %; s = la pendiente de la curva de concentración-respuesta; x = la concentración de este compuesto.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares Human platelet pellet Concentraciones 0–60 nM, dissolved in DMSO Tiempo de incubación 5 min Método For assay of washed platelet aggregation (WPA), the platelet pellets are isolated from human blood and re-suspended to 2 × 10¹⁵/L in Tyrodes buffer (TB) containing 1 μM hirudin and 0.02 U/mL apyrase. Then, the platelet suspension is left to rest at room temperature for 30 min. Just prior to time for assay, CaCl₂ is added to a final concentration of 2 mM. AZD6482, dissolved in DMSO, is added to a 96-well plate prior to the addition of the washed platelet suspension. The platelet suspension is preincubated with this compound for 5 min. Light absorption at 650 nm is recorded before and after a 5 min plate shake and referred to as recording 0 (R0) and Rl. A mouse anti-human CD9 antibody is added (at a donor specific concentration) to each well prior to next 10 min plate shake and light absorption recording; R2. For data analysis, light absorbance in wells with TB are subtracted from all readings before percent aggregation is calculated according the formula: [(R1-R2)/R1] × 100 = % aggregation. Spontaneous aggregation or pro-aggregatory effect of the inhibitor is evaluated by the same formula, [(R0-Rl)/R0] × 100 = % aggregation. IC50 values are calculated according to the equation, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, where y = % inhibition; a = 0%; b = 100%; s = the slope of the concentration-response curve; x = this chemical concentration.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayo de inhibición enzimática de PI3K
La inhibición de PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ y PI3Kδ se evalúa en un ensayo de actividad enzimática basado en AlphaScreen utilizando enzimas recombinantes humanas. El ensayo mide la conversión de PIP2 a PIP3 mediada por PI3K. El PIP3 biotinilado, un dominio de homología de pleckstrina (PH) marcado con GST y las dos perlas AlphaScreen forman un complejo que emite una señal tras la excitación con láser a 680 nm. El PIP3 formado en la reacción enzimática compite con el PIP3 biotinilado por la unión al dominio PH, reduciendo así la señal con el aumento del producto enzimático. Este compuesto se disuelve en DMSO y se añade a placas de 384 pocillos. PBKβ, PBKα, PBKγ o PBKδ se añade en un tampón Tris (50 mM Tris pH 7,6, 0,05 % CHAPS, 5 mM DTT y 24 mM MgCl₂) y se deja preincubar con este producto químico durante 20 minutos antes de la adición de la solución de sustrato que contiene PIP2 y ATP. La reacción enzimática se detiene después de 20 minutos mediante la adición de una solución de parada que contiene EDTA y biotina-PIP3, seguida de la adición de una solución de detección que contiene GST-grpl PH y perlas AlphaScreen. Las placas se dejan durante un mínimo de 5 horas en la oscuridad antes del análisis. La concentración final de DMSO, ATP y PIP2 en el ensayo son, respectivamente, 0,8 %, 4 μM y 40 μM. Los valores de IC50 se calculan según la ecuación, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, donde y = % de inhibición; a = 0 %; b = 100 %; s = la pendiente de la curva de concentración-respuesta; x = la concentración de este compuesto.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
Human platelet pellet
Concentraciones
0–60 nM, dissolved in DMSO
Tiempo de incubación
5 min
Método
For assay of washed platelet aggregation (WPA), the platelet pellets are isolated from human blood and re-suspended to 2 × 10¹⁵/L in Tyrodes buffer (TB) containing 1 μM hirudin and 0.02 U/mL apyrase. Then, the platelet suspension is left to rest at room temperature for 30 min. Just prior to time for assay, CaCl₂ is added to a final concentration of 2 mM. AZD6482, dissolved in DMSO, is added to a 96-well plate prior to the addition of the washed platelet suspension. The platelet suspension is preincubated with this compound for 5 min. Light absorption at 650 nm is recorded before and after a 5 min plate shake and referred to as recording 0 (R0) and Rl. A mouse anti-human CD9 antibody is added (at a donor specific concentration) to each well prior to next 10 min plate shake and light absorption recording; R2. For data analysis, light absorbance in wells with TB are subtracted from all readings before percent aggregation is calculated according the formula: [(R1-R2)/R1] × 100 = % aggregation. Spontaneous aggregation or pro-aggregatory effect of the inhibitor is evaluated by the same formula, [(R0-Rl)/R0] × 100 = % aggregation. IC50 values are calculated according to the equation, y = {a+[(b-a)/(l+(x/IC50)^s)]}, where y = % inhibition; a = 0%; b = 100%; s = the slope of the concentration-response curve; x = this chemical concentration.

Referencias

http://www.wipo.int/patentscope/search/en/WO2009093972

Validación de productos por parte del cliente

: , , Mol Cancer Res, 2017, 15(6):765-775

: , , One customer

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

: Datos de [ , , Oncotarget, 2016, 7(34):54897-54912 ]

Sellecks AZD6482 Ha sido citado por 27 Publicaciones

Human colonic organoids for understanding early events of familial adenomatous polyposis pathogenesis [ J Pathol, 2025, 265(1):26-40]	PubMed: 39641466
Longitudinal phosphoproteomics reveals the PI3K-PAK1 axis as a potential target for recurrent colorectal liver metastases [ Cell Rep, 2024, 43(12):115061]	PubMed: 39689713
Molecular mechanisms of PI3K isoform dependence in embryonic growth [ J Turk Ger Gynecol Assoc, 2024, 25(3):159-166]	PubMed: 39219229
A Gene Co-Expression Network-Based Drug Repositioning Approach Identifies Candidates for Treatment of Hepatocellular Carcinoma [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1573]	PubMed: 35326724
ZAP70 Activation Compensates for Loss of Class IA PI3K Isoforms Through Activation of the JAK-STAT3 Pathway [ Cancer Diagn Progn, 2022, 2(3):391-404]	PubMed: 35530641
Synergism between the phosphatidylinositol 3-kinase p110β isoform inhibitor AZD6482 and the mixed lineage kinase 3 inhibitor URMC-099 on the blockade of glioblastoma cell motility and focal adhesion formation [ Cancer Cell Int, 2021, 21(1):24]	PubMed: 33407478
Metabolic Imaging Detects Resistance to PI3Kα Inhibition Mediated by Persistent FOXM1 Expression in ER+ Breast Cancer [ Cancer Cell, 2020, S1535-6108(20)30427-X]	PubMed: 32976773
PIK3CA C-terminal frameshift mutations are novel oncogenic events that sensitize tumors to PI3K-α inhibition [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2020, 117(39):24427-24433]	PubMed: 32929011
Targeting phosphatidylinositol 3 kinase-β and -δ for Bruton tyrosine kinase resistance in diffuse large B-cell lymphoma [ Blood Adv, 2020, 4(18):4382-4392]	PubMed: 32926124
Application of a Biphasic Mathematical Model of Cancer Cell Drug Response for Formulating Potent and Synergistic Targeted Drug Combinations to Triple Negative Breast Cancer Cells. [ Cancers (Basel), 2020, 27;12(5)pii: E1087]	PubMed: 32349331

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