AZD4547 (Fexagratinib)

En comparación con FGFR1-3, AZD4547 muestra una actividad más débil contra FGFR4 con una IC50 de 165 nM. AZD4547 solo inhibe la actividad de la quinasa recombinante VEGFR2 (KDR) con una IC50 de 24 nM, en la prueba de selectividad in vitro contra un panel diverso de quinasas humanas representativas. AZD4547 a 0,1 μM no exhibe actividad contra una serie de quinasas recombinantes que incluyen ALK, CHK1, EGFR, MAPK1, MEK1, p70S6K, PDGFR, PKB, Src, Tie2 y PI3-quinasa. Consistentemente, la potente selectividad de AZD4547 para FGFR1-3 sobre FGFR4, IGFR y KDR también se observa en ensayos de fosforilación celular. AZD4547 tiene una potente actividad antiproliferativa in vitro solo contra líneas celulares tumorales que expresan FGFRs desregulados como KG1a, Sum52-PE y KMS11 con una IC50 de 18-281 nM, y es inactivo contra MCF7, así como más de 100 líneas celulares tumorales adicionales. El tratamiento con AZD4547 inhibe potentemente la fosforilación de FGFR y MAPK en líneas celulares tumorales humanas de manera dependiente de la dosis. AZD4547 también inhibe potentemente la fosforilación de FRS2 y PLCγ, marcadores descendentes de la señalización de FGFR. En particular, AZD4547 afecta la fosforilación de AKT en las líneas celulares mamarias, MCF7 y Sum52-PE, pero no en las líneas KG1a y KMS11. El tratamiento con AZD4547 induce significativamente la apoptosis en células Sum52-PE y KMS11, aumenta drásticamente la detención en G1 pero no la apoptosis en células KG1a, y no tiene efecto sobre la distribución del ciclo celular o la apoptosis en células MCF7. [1]

La administración oral de AZD4547 a 3 mg/kg dos veces al día en ratones con tumores KMS11 resulta en una inhibición significativa del crecimiento tumoral del 53% en comparación con los controles tratados con vehículo, y AZD4547 a 12,5 mg/kg una vez al día o 6,25 mg/kg dos veces al día conduce a una estasis tumoral completa, lo que se asocia con una modulación farmacodinámica proporcional a la dosis de phospho-FGFR3 y una proliferación reducida de células tumorales KMS11. Además, la administración oral de AZD4547 a 12,5 mg/kg una vez al día resulta en una inhibición del crecimiento tumoral del 65% en el modelo de xenoinjerto KG1a de fusión de FGFR1. A niveles de dosis eficaces, AZD4547 no exhibe efectos antiangiogénicos. AZD4547 no tiene un efecto significativo sobre la presión arterial y, por lo tanto, carece de actividad anti-KDR in vivo. Consistentemente, la administración de 6,25 mg/kg de AZD4547 por vía oral dos veces al día es inactiva en los modelos de xenoinjerto sensibles al cediranib, incluyendo Calu-6, HCT-15 y LoVo. [1]

• Actividad quinasa de AZD4547

  La capacidad de AZD4547 para inhibir las actividades quinasas recombinantes humanas de FGFR1-3 se prueba utilizando concentraciones de ATP iguales o ligeramente inferiores a las K_m respectivas.

• Líneas celulares

  KG1a, Sum52-PE, KMS11, and MCF7

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of AZD4547 for 72 hours. The antiproliferative IC50 values are obtained by MTS proliferation assay. For fluorescence-activated cell sorting (FACS), cells are fixed with 70% ethanol and then incubated with propidium iodide/RNase A labeling solution. Cell cycle profiles are assessed with a FACSCalibur instrument and CellQuest analysis software. For apoptotic analysis, cells and media are gently harvested and centrifuged, followed by washing of cell pellets. Cells are then processed for Annexin V isothiocyanate (FITC) staining and propidium iodide uptake. The proportion of cells staining positive for Annexin V are then assessed with a FACSCalibur instrument and quadrant sorting is done by CellQuest analysis software.

• Modelos animales

  Female swiss derived nude (nu/nu) and severe combined immunodeficient mice (SCID) injected s.c. with LoVo, HCT-15, Calu-6, KMS11 or KG1a

• Dosificaciones

  1.5-50 mg/kg

• Administración

  Oral gavage once daily or twice daily