AZ 628

AZ628 previene la activación de varias tirosina proteínas quinasas, incluyendo VEGFR2, DDR2, Lyn, Flt1, FMS y otras. AZ628 suprime el crecimiento dependiente e independiente del anclaje, da lugar a la detención del ciclo celular e induce apoptosis en líneas celulares de colon y melanoma que albergan la mutación B-RafV600E. El perfil de reactividad cruzada de AZ628 sugiere que, de forma similar, AZ628 puede ser antiangiogénico basándose en la prevención de VEGFR2. [1] Los clones resistentes a AZ628 son aproximadamente 100 veces más resistentes a AZ628 que la línea celular parental, exhibiendo una IC50 de aproximadamente 10 μM, en comparación con 0,1 μM para la línea celular parental. Se observa una supresión efectiva de los niveles de p-ERK1/2 en la línea celular parental M14 tras el tratamiento con concentraciones crecientes de AZ628. Los clones resistentes a AZ628 expresan niveles elevados de CRAF. La expresión elevada de CRAF es un mecanismo potencial de resistencia adquirida a la exposición continua a AZ628, lo que resulta en una activación sostenida de ERK1/2. La actividad de p-ERK1/2 no se inhibe significativamente por la exposición a AZ628 en una de estas tres líneas celulares insensibles a AZ628 (Wm1552C). A diferencia de las células M14 resistentes a AZ628 en las que AZ628 no logra suprimir la activación de ERK, el tratamiento con AZ628 atenúa eficazmente la activación de ERK en las células de melanoma mutantes NRAS.[2]

• Líneas celulares

  M14 expressing the V600E BRAF mutation

• Concentraciones

  0.01-10 μM

• Tiempo de incubación

  Overnight

• Método

  Approximately 0.5-2.5 × 10⁵ M14 cells are seeded in 12 or 24 - well plates, respectively, in medium supplemented with 5% FBS. After overnight incubation, the cells are treated with various concentrations of AZ628. Fresh medium and drug is replaced every 2 days until the untreated control wells reached confluence. At this time-point, the media is removed and the cells are fixed in 4% formaldehyde in PBS for 20 minutes at room temperature. Cells are then washed twice with PBS and stained with a 1:5000 solution of the fluorescent nucleic acid stain Syto60. Quantitation of fluorescent signal intensity is carried out at 700 nm, using an Odyssey Infrared Imager. Each experiment is performed in quadruplicate and the results shown represent the average of the four values compared to untreated wells. Error bars represent standard deviation of the 4 values from the mean. High-throughput cell growth/viability assays are performed.