Spebrutinib (AVL-292)

N.º de catálogoS7173 Lote:S717302

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₂H₂₂FN₅O₃

Peso molecular

423.44

Número CAS

1202757-89-8

Solubilidad (25°C)*

In vitro

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	4.250mg/ml (10.04mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 85 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	0.530mg/ml (1.25mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Actividad biológica

Descripción

Spebrutinib (AVL-292) es un inhibidor de BTK covalente, oralmente activo y altamente selectivo con una IC50 de <0,5 nM, mostrando al menos 1400 veces más selectividad sobre otras quinasas analizadas. Se encuentra en Fase 1.

Objetivos

BTK
(Cell-free assay)

<0.5 nM

In vitro

Spebrutinib (AVL-292) exhibe una inhibición dosis-dependiente de Btk con una EC50 de 8 nM y de los componentes de señalización BCR corriente abajo en células Ramos. Al inhibir las actividades de BTK, inhibe aún más la proliferación de células B con una EC50 de 3 nM.

In vivo

En un modelo de ratón de artritis inducida por colágeno, Spebrutinib (AVL-292) (3-30 mg/kg, p.o.) inhibe de forma dosis-dependiente los signos clínicos de la enfermedad inflamatoria, incluyendo la reducción de la inflamación de las articulaciones y las patas y el enrojecimiento visible de las patas afectadas.

Características

Inhibidor selectivo de BTK biodisponible por vía oral que ha sido probado en ensayos clínicos de Fase I para el tratamiento de B-NHL, CLL y WM recaídos o refractarios.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[2]}	Procedimientos para el ensayo BTK OMNIA El ensayo de lectura continua Omnia se realiza esencialmente como lo describe el proveedor. Las condiciones del ensayo son: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox y 10 nM de enzima BTK. Brevemente, una mezcla de sustrato que contiene 1,13X ATP y el sustrato Y5 Sox se prepara primero en 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) que consiste en 20 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glicerofosfato, 5% glicerol y 0.2 mM DTT. Para las mediciones de IC50 de Spebrutinib (AVL-292), 5 μL de enzima se incuban con compuestos diluidos en serie (3 veces) preparados en 50% DMSO en una placa de microtitulación Corning (#3574) de 384 pocillos, blanca y de superficie no unida a 25°C durante 30 min. Las reacciones de quinasa se inician con la adición de 45 μL de la mezcla de sustrato ATP/Y5 y se monitorean a λex360/λem485 en un lector de placas Synergy 4 durante 60 minutos. Las curvas de progreso de cada pocillo se examinan para detectar la cinética de reacción lineal y las estadísticas de ajuste. La velocidad inicial de cada reacción se determina a partir de la pendiente de una gráfica de unidades de fluorescencia relativa versus tiempo y luego se grafica contra la concentración del inhibidor para estimar la IC50 utilizando el modelo de Respuesta, Pendiente Variable en GraphPad Prism de GraphPad Software.
Ensayo celular:^{^[2]}	Líneas celulares Human B cells Concentraciones ~1000 nM Tiempo de incubación 72 hours Método A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Ensayo de quinasa:^{^[2]}

Procedimientos para el ensayo BTK OMNIA
El ensayo de lectura continua Omnia se realiza esencialmente como lo describe el proveedor. Las condiciones del ensayo son: 40 μM ATP (1X K_MATP), 10 μM Y5-Sox y 10 nM de enzima BTK. Brevemente, una mezcla de sustrato que contiene 1,13X ATP y el sustrato Y5 Sox se prepara primero en 1X Omnia Kinase Reaction Buffer (KRB) que consiste en 20 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 5 mM β-glicerofosfato, 5% glicerol y 0.2 mM DTT. Para las mediciones de IC50 de Spebrutinib (AVL-292), 5 μL de enzima se incuban con compuestos diluidos en serie (3 veces) preparados en 50% DMSO en una placa de microtitulación Corning (#3574) de 384 pocillos, blanca y de superficie no unida a 25°C durante 30 min. Las reacciones de quinasa se inician con la adición de 45 μL de la mezcla de sustrato ATP/Y5 y se monitorean a λex360/λem485 en un lector de placas Synergy 4 durante 60 minutos. Las curvas de progreso de cada pocillo se examinan para detectar la cinética de reacción lineal y las estadísticas de ajuste. La velocidad inicial de cada reacción se determina a partir de la pendiente de una gráfica de unidades de fluorescencia relativa versus tiempo y luego se grafica contra la concentración del inhibidor para estimar la IC50 utilizando el modelo de Respuesta, Pendiente Variable en GraphPad Prism de GraphPad Software.

Ensayo celular:^{^[2]}

Líneas celulares
Human B cells
Concentraciones
~1000 nM
Tiempo de incubación
72 hours
Método
A suspension of resting purified naïve human B cells isolated by negative selection in RPMI is prepared at 0.4–0.5 × 10⁶ cells/ml. Cells are mixed together with α-human IgM (final concentration of 5 μg/ml in each well) and vehicle (dimethyl sulfoxide) or Spebrutinib (AVL-292) (final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0, 10.0, 100.0, or 1000 nM per well) and seeded in a 96-well plate. This compound is used at the specified concentrations. Cells are incubated for 56 hours in a humidified incubator maintained at 37°C and 5% CO₂. ³H-Thymidine is added (final concentration of 1 μCi in each well) and cells are incubated overnight, harvested, and measured for ³H incorporation. Experiments are performed in triplicate.

Referencias

http://www.celgene.com/pdfs/2011_ASH_AVL-292.pdf
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23709115/

Validación de productos por parte del cliente

: , , Allergy, 2017, 72(11):1666-1676

: , , J Biomol Screen, 2015, 20(7):876-886.

Sellecks Spebrutinib (AVL-292) Ha sido citado por 12 Publicaciones

Temporal mapping and pharmacological manipulation of signaling architecture of Tyrosine kinases in Traumatic Brain Injury (TBI) [ oparu, 2023, 10.18725/OPARU-47820]	PubMed: None
Surface-associated antigen induces permeabilization of primary mouse B-cells and lysosome exocytosis facilitating antigen uptake and presentation to T-cells [ Elife, 2021, 10e66984]	PubMed: 34704555
Assessment of the effects of Syk and BTK inhibitors on GPVI-mediated platelet signaling and function [ Am J Physiol Cell Physiol, 2021, 320(5):C902-C915]	PubMed: 33689480
Combining ibrutinib and checkpoint blockade improves CD8+ T-cell function and control of chronic lymphocytic leukemia in Em-TCL1 mice. [ Haematologica, 2020, 10.3324/haematol.2019.238154]	PubMed: 32139435
Differential impact of BTK active site inhibitors on the conformational state of full-length BTK [ Elife, 2020, 9e60470]	PubMed: 33226337
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, 51]	PubMed: N/A
Effects of Inhibitors against Syk-BTK-PI3K Signaling on Platelet Function [ ScholarsArchive@OSU, 2020, None]	PubMed: None
Inhibition of Bruton's Tyrosine Kinase Modulates Microglial Phagocytosis: Therapeutic Implications for Alzheimer's Disease [ J Neuroimmune Pharmacol, 2019, 10.1007/s11481-019-09839-0]	PubMed: 30758770
Improving CLL Vγ9Vδ2-T-cell fitness for cellular therapy by ex vivo activation and ibrutinib [ Blood, 2018, 132(21):2260-2272]	PubMed: 30213872
BTK inhibition is a potent approach to block IgE-mediated histamine release in human basophils. [Smiljkovic D, et al. Allergy, 2017, 10.1111/all.13166]	PubMed: 28328081

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