AT7519 HCl

N.º de catálogoS7808 Lote:S780801

Imprimir

Datos técnicos

Fórmula

C16H18Cl3N5O2
Peso molecular 418.71 Número CAS 902135-91-5
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción AT7519 HCl es un inhibidor multi-CDK para CDK1, 2, 4, 6 y 9 con una IC50 de 10-210 nM en ensayos sin células. Es menos potente para CDK3 y poco activo para CDK7. Fase 2.
Objetivos
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 Ver más
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
In vitro AT7519 es un inhibidor de CDK competitivo de ATP con un valor Ki de 38 nM para CDK1. AT7519 es inactivo contra todas las quinasas no-CDK con la excepción de GSK3β (IC50 = 89 nM). AT7519 muestra una potente actividad antiproliferativa en una variedad de líneas celulares tumorales humanas con valores de IC50 que van desde 40 nM para MCF-7 hasta 940 nM para SW620, lo que es consistente con la inhibición de CDK1 y CDK2. AT7519 induce citotoxicidad dependiente de la dosis en líneas celulares de mieloma múltiple (MM) con valores de IC50 que van de 0,5 a 2 μM a las 48 horas, siendo las líneas celulares más sensibles MM.1S (0,5 μM) y U266 (0,5 μM) y la más resistente MM.1R (>2 μM). No induce citotoxicidad en células mononucleares de sangre periférica (PBMNC). AT7519 supera parcialmente la ventaja proliferativa conferida por IL6 e IGF-1, así como el efecto protector de las células estromales de la médula ósea (BMSCs). AT7519 induce una rápida desfosforilación de la CTD de la ARN pol II en los sitios serina 2 y serina 5, y conduce a la inhibición de la transcripción, contribuyendo parcialmente a la citotoxicidad de las células MM inducida por AT7519. AT7519 induce la activación de GSK-3β mediante la regulación a la baja de la fosforilación de GSK-3β, lo que también contribuye a la apoptosis inducida por AT7519 independientemente de la inhibición de la transcripción.
In vivo Una dosificación dos veces al día de AT7519 (9,1 mg/kg) provoca la regresión tumoral de tumores s.c. tanto en etapa temprana como avanzada en los modelos de xenoinjerto de cáncer de colon HCT116 y HT29. El tratamiento con AT7519 (15 mg/kg) inhibe el crecimiento tumoral y prolonga la supervivencia general media de los ratones en el modelo murino de xenoinjerto de MM humano en asociación con un aumento de la activación de la caspasa 3.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayos de quinasa in vitro

    Los ensayos de quinasa para CDK1, CDK2 y GSK3-β se realizan todos en formato de unión a filtro radiométrico. Los ensayos para CDK5 están en formato DELFIA y para CDKs 4 y 6 en formato ELISA. Para CDK1 y CDK2, la CDK relevante y 0,12 μg/mL de Histona H1 se incuban en 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glicerofosfato, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM ortovanadato de sodio, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0,78 Ci/mmol) y diferentes concentraciones de AT7519 durante 2 o 4 horas respectivamente. Para GSK3-β, la enzima relevante y 5 μM de péptido de glucógeno sintasa 2 junto con 10 mM MOPS pH 7,0, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glicerol, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,01% β-mercaptoetanol, 15 μM ATP (2,31 Ci/mmol) y diferentes concentraciones de AT7519 se incuban durante 3 horas. Las reacciones del ensayo se detienen añadiendo un exceso de ácido ortofosfórico y se filtran utilizando placas de filtro Millipore MAPH. Las placas se lavan, se añade un centelleador y la radioactividad se mide mediante recuento de centelleo en un Packard TopCount. Para CDK5, CDK5/p35 y 1 μM de un péptido de Histona H1 biotinilado (Biotina-PKTPKKAKKL) se incuban en 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 0,025% Brij-35, 0,1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP y diferentes concentraciones de AT7519 durante 30 minutos. Las reacciones del ensayo se detienen usando EDTA, se transfieren a placas recubiertas de Neutravidina y el péptido fosforilado se cuantifica mediante un anticuerpo policlonal de conejo contra el sustrato fosfo-cdk1 y un anticuerpo secundario anti-conejo IgG marcado con europio DELFIA utilizando fluorescencia resuelta en el tiempo a λex=335nm, λem=620nm. Para los ensayos de CDK 4 y 6, las placas se recubren con GST-pRb769-921 y se bloquean con Superblock. CDK4 o 6 se incuba con 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7,4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,02% Triton X-100, 2,5% DMSO y diferentes concentraciones de AT7519; la reacción se inicia añadiendo ATP. Después de 30 minutos, las reacciones se detienen añadiendo 0,5 M EDTA pH 8,0. Las placas se lavan y se incuban durante una hora con el anticuerpo primario (anti-p-Rb Serina 780) diluido en Superblock, seguido del anticuerpo secundario (anti-conejo unido a fosfatasa alcalina) durante otra hora. Las placas se desarrollan utilizando el sistema Attophos y la fluorescencia se lee en un lector de placas Spectramax Gemini a una excitación de 450 nm y una emisión de 580 nm. En todos los casos, los valores de IC50 se calculan a partir de curvas replicadas, utilizando el software GraphPad Prism.
Ensayo celular:[2]
  • Líneas celulares

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • Tiempo de incubación

    24 or 48 hours

  • Método

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
Estudio en animales:[2]
  • Modelos animales

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • Dosificaciones

    15 mg/kg/day

  • Administración

    Dosed i.p.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

Validación de productos por parte del cliente

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

Datos de [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

Datos de [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

Sellecks AT7519 HCl Ha sido citado por 12 Publicaciones

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

POLÍTICA DE DEVOLUCIÓN
La Política de Devolución Incondicional de Selleck Chemical garantiza una experiencia de compra en línea fluida para nuestros clientes. Si no está satisfecho con su compra de alguna manera, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 7 días posteriores a su recepción. En caso de problemas de calidad del producto, ya sean problemas relacionados con el protocolo o con el producto, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 365 días a partir de la fecha de compra original. Siga las instrucciones a continuación al devolver productos.

ENVÍO Y ALMACENAMIENTO
Los productos Selleck se transportan a temperatura ambiente. Si recibe el producto a temperatura ambiente, tenga la seguridad de que el Departamento de Inspección de Calidad de Selleck ha realizado experimentos para verificar que la colocación a temperatura normal durante un mes no afectará la actividad biológica de los productos en polvo. Después de la recogida, guarde el producto de acuerdo con los requisitos descritos en la hoja de datos. La mayoría de los productos Selleck son estables en las condiciones recomendadas.

NO PARA USO HUMANO, DIAGNÓSTICO VETERINARIO O TERAPÉUTICO.