(R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid

N.º de catálogoS2812 Lote:S281201

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Datos técnicos

Fórmula

C30H30O8.C2H4O2
Peso molecular 578.61 Número CAS 866541-93-7
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 116 mg/mL (200.48 mM)
Ethanol 89 mg/mL (153.81 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción El ácido (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acético, el enantiómero R-(-) del ácido Gossypol acético, se une a Bcl-2, Bcl-xL y Mcl-1 con Ki de 0,32 μM, 0,48 μM y 0,18 μM en ensayos libres de células; no inhibe el dominio BIR3 y BID. El AT-101 desencadena simultáneamente apoptosis y un tipo citoprotector de autophagy. Fase 2.
Objetivos
Mcl-1
(Cell-free assay)		 Bcl-2
(Cell-free assay)		 Bcl-xL
(Cell-free assay)
0.18 μM(Ki) 0.32 μM(Ki) 0.48 μM(Ki)
In vitro El AT-101 inhibe un panel de diferentes neoplasias linfoproliferativas con un IC50 que oscila entre 1,2 μM y 7,4 μM. El AT-101 (10 μM) altera el Δψm de manera dependiente de la concentración y el tiempo en líneas de linfoma difuso de células B grandes y de linfoma de células del manto. El AT-101 (1 μM o 2 μM) combinado con carfilzomib (6 nM o 10 nM) induce la apoptosis en las líneas celulares HBL-2 y Granta. El AT-101 (20 μM durante 24 horas) produce una apoptosis mediana del 72 % y una regulación a la baja de Mcl-1 en linfocitos de LLC tanto en cultivo en suspensión como en cocultivo estromal. Las células estromales expresan niveles indetectables de antiapoptóticos, pero niveles altos de proteínas ERK y AKT activadas y tienen poca o ninguna apoptosis con AT-101. El AT-101 induce la apoptosis de manera dependiente del tiempo y la dosis, con valores de ED50 de 1,9 mM y 2,4 mM en células Jurkat T y U937, respectivamente. El AT-101 (10 μM) combinado con radiación (32 Gy) induce más apoptosis que la radiación sola y excede la suma de los efectos causados por los tratamientos de agente único. El AT-101 activa SAPK/JNK de manera dependiente de la dosis y el tiempo. El AT-101 (10 µM) induce la apoptosis a través de la activación de caspasa-9, -3 y -7 en células VCaP. El AT-101 (10 µM) disminuye la expresión de Bcl-2 y Mcl-1 en células VCaP. El AT-101 (< 20 μM) es capaz de inhibir el crecimiento de células de mieloma múltiple a pesar de los efectos de crecimiento estimulantes proporcionados por las células estromales en el medio de la médula ósea. El AT-101 (10 μM) induce la apoptosis en células de mieloma múltiple a través de la activación de caspasas 3, caspasas 9 y PARP. El AT-101 (10 μM) promueve la apoptosis en células de mieloma múltiple al alterar la relación Bax/Bcl-2 y el potencial de membrana mitocondrial.
In vivo El AT-101 sigue siendo detectable en plasma con concentraciones medias de 0,49 μM para el grupo de 35 mg/kg y 0,39 μM para el grupo de 200 mg/kg en ratones SCID beige portadores de xenoinjerto RL-DLBCL. La concentración plasmática máxima de AT-101 se observa después de 30 minutos de administración del fármaco en ambos niveles de dosis, mostrando el grupo de 200 mg/kg una concentración plasmática media casi 4 veces mayor que el grupo de 35 mg/kg (7,88 μM y 27,78 μM, respectivamente) en ratones SCID beige. El AT-101 (25 mg/kg a 100 mg/kg, oralmente) resulta indefinidamente en un inicio más temprano de pérdida de peso equivalente a más del 10% del peso previo al tratamiento y muerte en ratones SCID beige. El AT-101 (35 mg/kg, oralmente por día durante 10 días) más ciclofosfamida (Cy) intraperitoneal y rituximab (R) intraperitoneal muestran un control significativo del volumen tumoral en comparación con cualquier otro grupo de tratamiento. El AT-101 (15 mg/kg, p.o., 5 días/semana) como agente único en ratones intactos reduce significativamente el desarrollo del crecimiento tumoral de VCaP en comparación con los tumores no tratados en las semanas 2 a 6. El AT-101 en combinación con la castración quirúrgica retrasa el inicio del crecimiento tumoral de VCaP independiente de andrógenos en comparación con los grupos de solo castración o solo AT-101 en ratones.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo de unión basado en polarización de fluorescencia

    Para los experimentos de unión competitiva, la proteína Bcl-2 (40 nM) y el péptido FAM-Bid (2,5 nM) se preincuban en el tampón de ensayo (100 mM fosfato de potasio, pH 7,5; 100 μg/mL globulina gamma bovina; 0,02 % azida de sodio). Se añaden 5 μL de una solución de AT101 en DMSO a la solución de Bcl-2/FAM-Bid en placas Dynex de 96 pocillos, negras y de fondo redondo para producir un volumen final de 125 μL. Para cada experimento, se incluyen en cada placa de ensayo un control que contiene Bcl-2 y péptido Flu-Bid (equivalente a 0 % de inhibición) y otro control que contiene solo FAM-Bid. Después de 4 horas de incubación, los valores de polarización en unidades de milipolarización (mP) se midieron a una longitud de onda de excitación de 485 nm y una longitud de onda de emisión de 530 nm utilizando el lector de placas Ultra. El IC50, la concentración del inhibidor a la que se desplaza el 50 % del péptido unido, se determina a partir de la gráfica utilizando análisis de mínimos cuadrados no lineales y ajuste de curvas realizado con el software GraphPad Prizm 4. El péptido Bid BH3 sin marcar se utiliza como control positivo. PF para la proteína Bcl-xL, péptido Bak BH3 marcado con éster succinimidílico de 6-carboxifluoresceína (FAM-Bak) en lugar del FAM-Bim para maximizar la señal. Se determina que FAM-Bak tiene una Kd de 6 nM para la proteína Bcl-xL. El ensayo de unión competitiva para Bcl-xL es el mismo que para Bcl-2 con las siguientes excepciones: 30 nM de proteína Bcl-xL y 2,5 nM de péptido FAM-Bak en el siguiente tampón de ensayo: 50 mM Tris-Bis, pH 7,4 y 0,01 % de globulina gamma bovina. PF para la proteína Mcl-1, péptido FAM-Bid y proteína Mcl-1 humana. Se determina que el péptido FAM-Bid se une a la proteína Mcl-1 humana con una Kd de 1,71 nM. Los ensayos de unión competitiva para Mcl-1 se realizan de la misma manera que para Bcl-2 con las siguientes excepciones: 5 nM de Mcl-1 y 1 nM de péptido Flu-Bid en el siguiente tampón de ensayo: 25 mM Tris, pH 8,0; 150 mM NaCl y 0,05 % de ácido Plurónico.
Ensayo celular:[2]
  • Líneas celulares

    RL, H9, SKI, HBL-2, Granta and JJN-3 cell lines

  • Concentraciones

    ~10 μM

  • Tiempo de incubación

    72 hours

  • Método

    Cells are counted and resuspended at an approximate concentration of 3×105 cells/well in a 24-well plate. AT-101 is diluted in DMSO that is maintained at a final concentration of less than 0.5%. Concentrations of AT-101 from 1 nM to 10 μM are used in most experiments. Following incubation at 37 ℃ in a 5% CO2 humidified incubator, 100 μL from each well is transferred to a 96-well opaque-walled plate; cell-Titer-Glo Reagent is added in a 1:1 ratio. Contents are mixed for 2 minutes on an orbital shaker to induce cell lysis. The plates are allowed to incubate at room temperature for 10 minutes before recording luminescence with a Synergy HT Multi-Detection Microplate Reader. In the schedule dependency experiments, serial dilutions of each drug are prepared in ratios relative to their IC50. Cells are preincubated with AT-101 for up to 72 hours, while 4-HC is added for a 24-hour period, being added at time 0, 24 hours, and 48 hours from the start of incubation. Each experiment is performed in triplicate and repeated at least twice.
Estudio en animales:[2]
  • Modelos animales

    SCID beige mice bearing RL-DLBCL xenograft

  • Dosificaciones

    100 mg/kg

  • Administración

    Oral gavage

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17034116/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18292288/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18836097/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19852810/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18084610/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18346839/

Validación de productos por parte del cliente

<p>(B and C) assessment of antimigration capacity in each group by transwell migration assay. Abbreviations: CDDP, cisplatin; DMSO, dimethyl sulfoxide.</p>

, , Drug Des Devel Ther, 2014, 8:2517-29.

The cellular autophagy induced by the concentration of AT101 (5 μM) and APE1 siRNA was examined by confocal microscopy with the application of Cyto-IDr autophagy detection kit.

Datos de [ , , Oncotarget, 2016, 7(23):34430-41 ]

Effect of AT-101 (AT) on MM cell lines survival. The survival of human (MM-B1, H-Meso-1, and MM-F1) and mouse (#40a) MM cell lines were assessed by the SRB assay after 24, 48, and 72 h of treatment with DMSO or AT-101. The percentage of surviving cells treated with the compound was calculated by normalizing the OD value to that of the control cultures (DMSO). The results are expressed as the means ± SD of three independent experiments performed in triplicate (xp ≤ 0.05, ∗p ≤ 0.01, #p ≤ 0.001 compared with the cultures treated with DMSO).

Datos de [ , , Front Pharmacol, 2018, 9:1269 ]

AT-101 enhances the antimigration ability of CDDP in A549 cells exposed to A549 cell-conditioned medium. Notes: (A) The cell migration assay was conducted using Transwell® plates. A549 cells were treated with the control vehicle, 5 μM CDDP, 5 μM AT-101, or 5 μM AT-101 plus 5 μM CDDP and the supernatants were collected as the tumor conditioned medium. A549 cells were suspended in serum-free Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium. A549 cells were seeded to the upper chambers, and the lower chambers were filled with RPMI 1640 medium containing 10% fetal bovine serum or tumor conditioned medium. After incubation for 18 hours at 37°C, cells were fixed, stained, and analyzed under inverted light microscopy (40× magnification). The number of migrated cells was counted using an inverted microscope. (B) Bar graph showing the migrating cell numbers of different treatment groups. Data are presented as the mean ± standard deviation of at least three independent experiments. **P<0.01 by one-way analysis of variance. Abbreviation: CDDP, cisplatin.

Datos de [ , , Drug Des Devel Ther, 2015, 9:2887-910 ]

Sellecks (R)-(-)-Gossypol (AT-101) acetic acid Ha sido citado por 20 Publicaciones

Follicle stimulating hormone controls granulosa cell glutamine synthesis to regulate ovulation [ Protein Cell, 2024, pwad065] PubMed: 38167949
Pharmacological Targeting of Bcl-2 Induces Caspase 3-Mediated Cleavage of HDAC6 and Regulates the Autophagy Process in Colorectal Cancer [ Int J Mol Sci, 2023, 24(7)6662] PubMed: 37047634
Exploiting ulnerabilities induced b recurrent mutations in chondrosarcoma and giant cell tumour of bone: therapeutic targeting of the altered epigenome and be [ Leiden University The Netherlands, 2023, ] PubMed: None
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Lactate Dehydrogenase B Is Required for Pancreatic Cancer Cell Immortalization Through Activation of Telomerase Activity [ Front Oncol, 2022, 12:821620] PubMed: 35669414
Gossypol Acetic Acid Attenuates Cardiac Ischemia/Reperfusion Injury in Rats via an Antiferroptotic Mechanism [ Biomolecules, 2021, 11(11)1667] PubMed: 34827665
AT101 [(-)-Gossypol] Selectively Inhibits MCL1 and Sensitizes Carcinoma to BH3 Mimetics by Inducing and Stabilizing NOXA [ Cancers (Basel), 2020, 12(8):E2298] PubMed: 32824203
Using CETSA assay and a mathematical model to reveal dual Bcl-2/Mcl-1 inhibition and on-target mechanism for ABT-199 and S1. [ Eur J Pharm Sci, 2020, 142:105105] PubMed: 31669390
Comparison of putative BH3 mimetics AT-101, HA14-1, sabutoclax and TW-37 with ABT-737 in platelets. [ Platelets, 2020, 10.1080/09537104.2020.1724276] PubMed: 32079453
Effect of Exosomal APE1 on Sensitivity of NSCLC A549 Cells to Cisplatin [ Cancer Research on Prevention and Treatment, 2020, (7): 492-497] PubMed: None

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