AMG-900

AMG 900 es una nueva clase de inhibidores de molécula pequeña de ftalazinamina competitivos de ATP de las Aurora kinases. En células HeLa, AMG 900 inhibe la autofosforilación de Aurora-A y -B, así como la fosforilación de la histona H3 en Ser, un sustrato proximal de Aurora-B. La respuesta celular predominante de las células tumorales al tratamiento con AMG 900 es una división celular abortada sin una detención mitótica prolongada, lo que finalmente resulta en la muerte celular. AMG 900 inhibe la proliferación de 26 líneas de células tumorales, incluyendo líneas celulares resistentes a otros inhibidores de Aurora quinasa (AZD1152, MK-0457 y PHA-739358), en bajas concentraciones nanomolares (aproximadamente 2-3 nM). Además, AMG 900 es activo en una línea celular variante HCT116 resistente a AZD1152 que alberga una mutación de Aurora-B (W221L). [1]

La administración oral de AMG 900 bloquea la fosforilación de la histona H3 de manera dosis-dependiente e inhibe significativamente el crecimiento de xenoinjertos tumorales HCT116. AMG 900 es ampliamente activo en múltiples modelos de xenoinjertos, incluyendo 3 modelos de xenoinjertos multirresistentes, que representan 5 tipos de tumores. [1] AMG 900 exhibe una depuración de baja a moderada y un pequeño volumen de distribución. Su vida media de eliminación terminal osciló entre 0,6 y 2,4 horas. AMG 900 se absorbe bien en animales en ayunas con una biodisponibilidad oral del 31% al 107%. La ingesta de alimentos tiene un efecto sobre la tasa (ratas) o la extensión (perros) de la absorción oral de AMG 900. Se predice que la depuración y el volumen de distribución en estado estacionario en humanos serán de 27,3 mL/h/kg y 93,9 mL/kg, respectivamente. AMG 900 exhibe propiedades farmacocinéticas aceptables en especies preclínicas y se predice que tendrá una depuración baja en humanos. [2]

• Ensayos de quinasa enzimática

  Las proteínas recombinantes Aurora-A (TPX2) y Aurora-B marcadas con GST o His se expresan utilizando un sistema de baculovirus y se purifican mediante cromatografía de afinidad. La actividad de AMG 900 se evalúa utilizando un ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea (HTRF) estandarizado. Los ensayos enzimáticos para otras 24 quinasas (Aurora-C, p38α, TYK2, JNK2, JAK3, c-Met, VEGFR2, p38β, TIE-2, ABL (T315I), ERK1, BTK, JNK3, CDK5, PKAα, JNK1, p70S6K, PKBα, MSK1, LCK, SRC, IGFR, JAK2 y c-KIT) se realizan internamente de manera similar. Las concentraciones de enzima, sustrato peptídico y ATP en la reacción se optimizan en función de la actividad específica de la quinasa y los valores de K_m medidos para sus sustratos correspondientes. AMG 900 se evalúa en un ensayo de unión por competencia de quinoma (n = 353 quinasas únicas) por Ambit Biosciences. AMG 900 se examina inicialmente a una única concentración de 1000 nM, y se determinan las constantes de unión cuantitativas (Kd) para cada acierto positivo (< 20 porcentaje del control).

• Líneas celulares

  Different tumor cell lines including NCI-H460, MDA-MB231, MES-SA, NCI-H460 PTX, MDA-MB-231 PTX, MES-SA Dx5, and HCT-15.

• Concentraciones

  0.5, 5.0, 50 nM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Tumor cells are treated with AMG 900 for 48 hours, washed twice with complete media, and cells are replated at a density of 5000 cells per well in drug-free complete media. Cells are grown until the DMSO control wells are confluent. Cells are stained with crystal violet dye, washed with distilled water, and imaged using a digital scanner.

• Modelos animales

  Nude mice bearing established HCT116 tumors

• Dosificaciones

  3.75, 7.5, or 15 mg/kg

• Administración

  Orally administered