Alvespimycin (17-DMAG) Hydrochloride

El 17-DMAG muestra una potencia ~2 veces mayor contra la Hsp90 humana que el 17-AAG, con una IC50 de 62 nM frente a 119 nM. En células SKBR3 y SKOV3 que sobreexpresan la proteína cliente de Hsp90 Her2, el 17-DMAG causa una regulación a la baja de Her2 con EC50 de 8 nM y 46 nM, respectivamente, así como la inducción de Hsp70 con EC50 de 4 nM y 14 nM, respectivamente, lo que lleva a una citotoxicidad significativa con GI50 de 29 nM y 32 nM, respectivamente, consistente con la inhibición de Hsp90. [1] El 17-DMAG en combinación con vorinostat induce sinérgicamente la apoptosis de las células de LCM cultivadas, así como de las células de LCM primarias, con mayor potencia que cualquiera de los agentes por separado, al atenuar marcadamente los niveles de ciclina D1 y CDK4, así como de c-Myc, c-RAF y Akt. [3] A diferencia del 17-AAG, que solo es activo para IKKβ en las células de leucemia linfocítica crónica (LLC), el tratamiento con 17-DMAG conduce eficazmente al agotamiento de la proteína cliente de Hsp90, lo que resulta en una disminución de la unión al ADN de NF-κB p50/p65, una disminución de la transcripción del gen diana de NF-κB y la apoptosis dependiente de caspasas. Al dirigirse a la familia NF-κB, el 17-DMAG media selectivamente la citotoxicidad dependiente de la dosis y el tiempo contra las células de LLC, pero no contra las células T normales o las células NK importantes para la vigilancia inmunitaria. [5]

El tratamiento con 17-DMAG a 5 mg/kg o 25 mg/kg tres veces por semana reduce significativamente el crecimiento tumoral de los xenoinjertos TMK-1, al reducir significativamente el área vascular y el número de células tumorales proliferantes en las secciones. [2] De acuerdo con la inhibición de la señalización de FAK in vivo, el tratamiento con 17-DMAG a 25 mg/kg tres veces por semana suprime significativamente el crecimiento tumoral y la metástasis de los xenoinjertos ME180 y SiHa en ratones. [4] La administración de 17-DMAG a 10 mg/kg durante 16 días disminuye significativamente el recuento de glóbulos blancos y prolonga la supervivencia en un modelo de ratón de trasplante TCL1-SCID. [5]

• Ensayo de unión competitiva basado en polarización de fluorescencia (FP)

  Este ensayo utiliza un análogo de geldanamicina marcado con difluoruro de boro dipirrometeno (BODIPY-AG) como sonda y mide la polarización de fluorescencia tras la unión de la sonda a una proteína. La proteína Hsp90 humana nativa (isoformas α + β) se aísla de células HeLa. La solución de BODIPY-AG se prepara fresca en tampón de ensayo FP (20 mM HEPES-KOH, pH 7,3, 1,0 mM EDTA, 100 mM KCl, 5,0 mM MgCl₂, 0,01% NP-40, 0,1 mg/mL de γ-globulina bovina (BGG) fresca, 1,0 mM de DTT fresco y un inhibidor de proteasa de una solución madre en DMSO. Las curvas de competencia se obtienen mezclando 10 μL de cada una de las soluciones que contienen BODIPY-AG y Hsp90, y una dilución en serie de 17-DMAG recién preparada en tampón de ensayo FP a partir de una solución madre en DMSO. Las concentraciones finales son 10 nM BODIPY-AG, 40 o 60 nM Hsp90, concentración variable de 17-DMAG (0,10 nM-10 μM) y ≤0,25% de DMSO en una microplaca de 384 pocillos. Después de 3 horas de incubación a 30 °C, la anisotropía de fluorescencia (γ_Ex = 485 nm, γ_Em = 535 nm) se mide en un lector de placas multietiqueta EnVision 2100. El valor de IC50 de 17-DMAG se obtiene de las curvas de competencia.

• Líneas celulares

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tiempo de incubación

  24, or 48 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of 17-DMAG for 24, or 48 hours. For the assessment of cytotoxicity, MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 24 hours before spectrophotometric measurement. Apoptosis is determined by staining with annexin isothiocyanate and propidium iodide (PI).

• Modelos animales

  SCID mice engrafted with TCL1 leukemia cells

• Dosificaciones

  10 mg/kg

• Administración

  Intraperitoneal injection 5 times per week