Afatinib (BIBW2992)

N.º de catálogoS1011 Lote:S101114

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Datos técnicos

Fórmula

C24H25ClFN5O3
Peso molecular 485.94 Número CAS 850140-72-6
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (199.61 mM)
Ethanol 97 mg/mL (199.61 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Afatinib inhibe EGFR/ErbB irreversiblemente in vitro con IC50 de 0,5, 0,4, 10, 14, 1 nM para EGFRwt, EGFR L858R , EGFR L858R/T790M ErbB2 (HER2) y ErbB4 (HER4), respectivamente. Este compuesto induce la autofagia.
Objetivos
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 ErbB4
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 1 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 muestra una potente actividad contra las formas tanto salvajes como mutantes de EGFR y HER2. Es similar a Gefitinib en potencia contra EGFR L858R, pero aproximadamente 100 veces más activo contra el doble mutante EGFR L858R-T790M resistente a Gefitinib. Este compuesto exhibe potentes efectos sobre la fosforilación de EGFR y HER2 in vivo. Se compara favorablemente con compuestos de referencia (como Lapatinib et al.) en todos los tipos de células probados, como la línea celular de carcinoma epidermoide humano A431 que expresa EGFR wt, células murinas NIH-3T3 transfectadas con HER2 wt, así como la línea celular de cáncer de mama BT-474 y la línea celular de cáncer gástrico NCI-N87, que expresan HER2 endógeno.
In vivo La administración oral diaria de BIBW2992 a 20 mg/kg durante 25 días resulta en una dramática regresión tumoral con una relación acumulada de volumen tumoral tratado/control (relación T/C) del 2%. La fosforilación reducida de EGFR y AKT se confirma mediante tinción inmunohistoquímica de las secciones de tejido. Por lo tanto, al igual que el lapatinib y el neratinib, este compuesto es un inhibidor de la Protein Tyrosine Kinase (TKI) de próxima generación que inhibe irreversiblemente las quinasas del receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (Her2) y del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). No solo es activo contra mutaciones de EGFR dirigidas por TKI de primera generación como Erlotinib o Gefitinib, sino también contra aquellas insensibles a estas terapias estándar.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Ensayos de actividad quinasa in vitro

    El dominio de Protein Tyrosine Kinase de tipo salvaje del EGFR humano, así como el del doble mutante EGFR L858R/T790M, se fusionan a la Glutathione-S-transferasa (GST) y se extraen. La actividad enzimática se ensaya luego en presencia del inhibidor BIBW2992, diluido en serie en 50% de DMSO. Un polímero aleatorio pEY (4:1) se utiliza como sustrato y el pEY biotinilado (bio-pEY) se añade como sustrato trazador. El dominio Protein Tyrosine Kinase de HER2 se clona utilizando el sistema de baculovirus y se extrae de manera similar al de la Protein Tyrosine Kinase EGFR. Los detalles de los ensayos para la actividad quinasa de EGFR, HER2, SRC, BIRK y VEGFR2 están disponibles en la información suplementaria.
Ensayo celular:

[1]
  • Líneas celulares

    NSCLC cells

  • Concentraciones

    0-10 μM

  • Tiempo de incubación

    1 hour

  • Método

    1 × 104 NSCLC cells are transferred into each well of a 96-well plate and cultured overnight in serum-free media for the EGFR phosphorylation assay. After addition of this compound on the next day, the plates are incubated at 37 °C for 1 hour. EGF-stimulation is done using 100 ng/mL for 10 min at room temperature. Cells are washed with ice cold PBS, extracted with 120 μL HEPEX buffer per well and shaken at room temperature for 1 hour. In all 2 × 104 cells per well is used for the HER2 phosphorylation assay. Streptavidin precoated plates are coated with anti-EGFR-biotin at 1:100 dilution in blocking buffer and c-erb2/HER2 oncoprotein Ab-5(Clone N24)-Biotin. Cell extracts is then transferred to the antibody-coated wells and incubated at room temperature for 1 hour. Extinction is measured at 450 nm.
Estudio en animales:

[1]
  • Modelos animales

    Athymic NMRI-nu/nu female mice

  • Dosificaciones

    20 mg/kg

  • Administración

    Oral administration

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18408761/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24266694/

Validación de productos por parte del cliente

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Datos de [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Datos de [ Int J Proteomics , 2011 , 2011, 215496 ]

<p>After starved in serum-free medium for 24h, Breast cancer cells incubated with the indicated concentrations of BIBW2992 for 3h,followed by 15-minute stimolation of 100ng/ml EGF</p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Immunoblot analysis of serum starved H2030 cells pre-treated with 500 nM or 1 µM of gefitinib, crizotinib, CP-724714, or afatinib for 12 hr, followed by stimulation with EGF, HGF, NRG1, or their combination (50 ng/ml) for 10 min.

Datos de [ , , Nature, 2016, 534(7609):647-51 ]

Sellecks Afatinib (BIBW2992) Ha sido citado por 453 Publicaciones

Lysosomal EGFR acts as a Rheb-GEF independent of its kinase activity to activate mTORC1 [ Cell Res, 2025, 10.1038/s41422-025-01110-x] PubMed: 40259053
Longitudinal single-cell multiomic atlas of high-risk neuroblastoma reveals chemotherapy-induced tumor microenvironment rewiring [ Nat Genet, 2025, 10.1038/s41588-025-02158-6] PubMed: 40229600
The potential of lazertinib and amivantamab combination therapy as a treatment strategy for uncommon EGFR-mutated NSCLC [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101929] PubMed: 39874964
AP1-mediated reprogramming of EGFR expression triggers resistance to BLU-667 and LOXO-292 in RET-rearranged tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):154] PubMed: 40405293
Anti-galectin-9 therapy synergizes with EGFR inhibition to reprogram the tumor microenvironment and overcome immune evasion [ J Immunother Cancer, 2025, 13(7)e010926] PubMed: 40664443
Blocking cancer-fibroblast mutualism inhibits proliferation of endocrine therapy resistant breast cancer [ Mol Syst Biol, 2025, 10.1038/s44320-025-00104-6] PubMed: 40341770
PI3K-dependent GAB1/Erk phosphorylation renders head and neck squamous cell carcinoma sensitive to PI3Kα inhibitors [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):457] PubMed: 40533463
Exercise-induced adipokine Nrg4 alleviates MASLD by disrupting hepatic cGAS-STING signaling [ Cell Rep, 2025, 44(2):115251] PubMed: 39891907
Rare mutations at EGFR L747 position: molecular characteristics and superior response to afatinib in NSCLC patients [ ESMO Open, 2025, 10(9):105558] PubMed: 40834500
PTEN loss and ERBB2/ERBB3-mediated AKT reactivation drive resistance to MET inhibition in MET-amplified hepatocellular carcinoma [ Cell Oncol (Dordr), 2025, 10.1007/s13402-025-01097-y] PubMed: 40991144

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