Afatinib Dimaleate

N.º de catálogoS7810 Lote:S781004

Imprimir

Datos técnicos

Fórmula

C24H25ClFN5O3.2C4H4O4
Peso molecular 717.18 Número CAS 850140-73-7
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (139.43 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Afatinib Dimaleate inhibe irreversiblemente EGFR/HER2, incluyendo EGFR(wt), EGFR(L858R), EGFR(L858R/T790M) y HER2 con IC50 de 0,5 nM, 0,4 nM, 10 nM y 14 nM, respectivamente; 100 veces más activo contra el mutante L858R-T790M de EGFR resistente a Gefitinib. Afatinib (BIBW2992) Dimaleate induce la autophagy.
Objetivos
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 es más eficaz que erlotinib, gefitinib o lapatinib para inhibir la supervivencia de líneas celulares de cáncer de pulmón que albergan EGFR de tipo salvaje (H1666) o L858R/T790M (NCI-H1975). BIBW2992 es igualmente eficaz contra líneas de CPNM que expresan HER2 776insV (NCI-H1781) o EGFR E746_A750del (HCC827), pero no muestra actividad hacia las células A549, que expresan EGFR y HER2 de tipo salvaje. Afatinib mejora la citotoxicidad de topotecán y mitoxantrona en células SP, y aumenta la apoptosis inducida por topotecán y mitoxantrona en células SP.
In vivo En el modelo de xenoinjerto MDA-MB-453, BIBW2992 (20 mg/kg, p.o.) produce una regresión tumoral dramática con una relación de volumen tumoral tratado/control (relación T/C) acumulativa del 2 %, y una regulación a la baja de la fosforilación de EGFR y AKT. En los modelos de xenoinjerto A7, A431, FaDu, UT-SCC-14 y UT-SCC-15, la aplicación de BIBW 2992 (30 mg/kg, p.o.) conduce a una prolongación significativa del tiempo de crecimiento tumoral. En el modelo de xenoinjerto amplificado con HER2, Afatinib (30 mg/kg, p.o.) produce una marcada inhibición del crecimiento tumoral y una mejora significativa en la duración de la supervivencia global. En el xenoinjerto NCI-N87 de cáncer gástrico HER2-positivo, afatinib (25 mg/kg, p.o.) conduce a una regresión dramática del volumen tumoral en 4 días y una resolución tumoral casi completa después de 21 días de tratamiento.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo de actividad quinasa in vitro

    Quinasa EGFR: Cada reacción enzimática de 100 µL contenía 10 μL de inhibidor en 50 % de Me2SO, 20 μL de solución de sustrato (200 mM HEPES pH 7,4, 50 mM Mg-acetato, 2,5 mg/mL de poli (EY), 5 μg/mL de bio-pEY) y 20 µL de preparación enzimática. La reacción enzimática se inicia con la adición de 50 µL de una solución de ATP 100 µM preparada en 10 mM MgCl2. Los ensayos se realizan a temperatura ambiente durante 30 min y se terminan con la adición de 50 µL de solución de parada (250 mM EDTA en 20 mM HEPES pH 7,4). Se transfieren 100 µL a una microplaca recubierta con estreptavidina, después de un tiempo de incubación de 60 min a temperatura ambiente, la placa se lava con 200 µL de solución de lavado (50 mM Tris, 0,05 % Tween20). Se añade a los pocillos una alícuota de 100 µL de un anticuerpo anti-PY marcado con HRPO (PY20H Anti-Ptyr:HRP) a 250 ng/mL. Después de 60 min de incubación, la placa se lava tres veces con 200 µL de solución de lavado. Las muestras se desarrollan luego con 100 µL de solución de TMB Peroxidasa (A:B= 1:1). La reacción se detiene después de 10 min. La placa se transfiere a un lector ELISA y la extinción se mide a OD450nm. Enzima HER2-IC: La actividad enzimática se ensaya en presencia o ausencia de diluciones seriadas de inhibidor realizadas en 50 % de Me2SO. Cada reacción de 100 µL contiene componentes similares a los descritos para el ensayo de la quinasa EGFR con la adición de 1000 µM de Na3VO4. La reacción enzimática se inicia con la adición de 50 µL de solución de ATP 500 µM preparada en 10 mM de Mg-acetato. La dilución de la enzima se ajusta para que la incorporación de fosfato en bio-pEY sea lineal con respecto al tiempo y la cantidad de enzima. La preparación enzimática se diluye en 20 mM HEPES pH 7,4, 130 mM NaCl, 0,05 % Triton X-100, 1 mM DTT y 10 % de glicerol. Los ensayos se realizan a temperatura ambiente durante 30 min y se terminan con la adición de 50 µL de solución de parada. Ensayos de la quinasa Src: Cada reacción de 100 µL contenía 10 µL de inhibidor en 50 % de Me2SO, 20 µL de preparación enzimática, 20 µL de solución de sustrato suplementada con 1000 µM de Na3VO4. La reacción enzimática se inicia con la adición de 50 µL de una solución de ATP 1000 µM preparada en 10 mM de Mg-acetato. Ensayo de la quinasa BIRK: Se utiliza como solución de sustrato 250 mM Tris pH 7,4, 10 mM DTT, 2,5 mg/mL de poli(EY), 5 mg/mL de bio-pEY y la reacción enzimática se inicia con la adición de 50 µL de una solución de ATP 2 mM preparada en 8 mM MnCl2, 20 mM Mg-acetato. Ensayos de las quinasas VEGF2 y HGFR: Los ensayos se realizan a temperatura ambiente durante 20 minutos y se terminan con la adición de 10 µL de 5 % H3PO4. El precipitado se atrapa en filtros GF/B utilizando un recolector universal de 96 pocillos. Después de un lavado exhaustivo, la placa de filtro se seca durante 1 h a 50 °C, se sella y la radiactividad incorporada se determina mediante recuento por centelleo utilizando un TopCount™ o un Microbeta b counter™.
Ensayo celular:[2]
  • Líneas celulares

    SP and NSP cell lines

  • Concentraciones

    1 μM

  • Tiempo de incubación

    48 h

  • Método

    Cytotoxicity is determined using MTT assay. The IC 50 value is defined as the drug concentration resulting in 50% cell death. Both the fitted sigmoidal dose response curve and IC50 are calculated by Bliss method.
Estudio en animales:[4]
  • Modelos animales

    SCID mice harbouring ARK2 xenografts

  • Dosificaciones

    25 mg/kg

  • Administración

    p.o.

Referencias

  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2748240/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24972892/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25444177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25268372/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23578997/

Validación de productos por parte del cliente

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Datos de [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Datos de [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

(F) Stably transduced MCF10A cells were treated with the indicated drugs at 100 nM for 4 h in EGF- and serum-free media. Cell lysates were subjected to immunoblot analyses with the indicated antibodies.

Datos de [ , , Cancer Discov, 2017, 7(6):575-585 ]

Immunoblotting of lysates from EGFR L858R and EGFR L858M/L861Q NIH-3T3 cells treated with the indicated concentrations of gefitinib, osimertinib, or afatinib. The ratio of phospho-EGFR in treated vs. untreated samples was quantified by densitometry for each cell line.

Datos de [ , , J Thorac Oncol, 2017, 12(5):884-889 ]

Sellecks Afatinib Dimaleate Ha sido citado por 173 Publicaciones

Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids [ Cell, 2024, 187(3):712-732.e38] PubMed: 38194967
Clinical efficacy and identification of factors confer resistance to afatinib (tyrosine kinase inhibitor) in EGFR-overexpressing esophageal squamous cell carcinoma [ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):153] PubMed: 38937446
Romidepsin and afatinib abrogate JAK-STAT signaling and elicit synergistic antitumor effects in cutaneous T-cell lymphoma [ J Invest Dermatol, 2024, S0022-202X(23)03210-4] PubMed: 38219917
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
HB-EGF activates EGFR to induce reactive neural stem cells in the mouse hippocampus after seizures [ Life Sci Alliance, 2024, 7(9)e202201840] PubMed: 38977310
Discovery of nontriterpenoids from the rot roots of Panax notoginseng with cytotoxicity and their molecular docking study and experimental validation [ RSC Adv, 2023, 13(16):11037-11043] PubMed: 37033442
Irreversible tyrosine kinase inhibitors induce the endocytosis and downregulation of ErbB2 [ Biochem Biophys Rep, 2023, 34:101436] PubMed: 36824069
Silent mutations reveal therapeutic vulnerability in RAS Q61 cancers [ Nature, 2022, 603(7900):335-342] PubMed: 35236983
Group 3 innate lymphoid cells produce the growth factor HB-EGF to protect the intestine from TNF-mediated inflammation [ Nat Immunol, 2022, 23(2):251-261] PubMed: 35102343
PI3Kγ stimulates a high molecular weight form of myosin light chain kinase to promote myeloid cell adhesion and tumor inflammation [ Nat Commun, 2022, 13(1):1714] PubMed: 35361816

POLÍTICA DE DEVOLUCIÓN
La Política de Devolución Incondicional de Selleck Chemical garantiza una experiencia de compra en línea fluida para nuestros clientes. Si no está satisfecho con su compra de alguna manera, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 7 días posteriores a su recepción. En caso de problemas de calidad del producto, ya sean problemas relacionados con el protocolo o con el producto, puede devolver cualquier artículo(s) dentro de los 365 días a partir de la fecha de compra original. Siga las instrucciones a continuación al devolver productos.

ENVÍO Y ALMACENAMIENTO
Los productos Selleck se transportan a temperatura ambiente. Si recibe el producto a temperatura ambiente, tenga la seguridad de que el Departamento de Inspección de Calidad de Selleck ha realizado experimentos para verificar que la colocación a temperatura normal durante un mes no afectará la actividad biológica de los productos en polvo. Después de la recogida, guarde el producto de acuerdo con los requisitos descritos en la hoja de datos. La mayoría de los productos Selleck son estables en las condiciones recomendadas.

NO PARA USO HUMANO, DIAGNÓSTICO VETERINARIO O TERAPÉUTICO.