A-674563 HCl

N.º de catálogoS2670 Lote:S267001

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Datos técnicos

Fórmula

C22H22N4O.CIH
Peso molecular 394.9 Número CAS 2070009-66-2
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 72 mg/mL (182.32 mM)
Water 72 mg/mL (182.32 mM)
Ethanol 18 mg/mL (45.58 mM)
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 30.000mg/ml (75.97mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción A-674563 HCl es un inhibidor de Akt1 con un Ki de 11 nM en ensayos sin células, modestamente potente para PKA y >30 veces selectivo para Akt1 sobre PKC.
Objetivos
Akt1
(Cell-free assay)		 PKA
(Cell-free assay)		 CDK2
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 ERK2
(Cell-free assay)		 Ver más
11 nM(Ki) 16 nM(Ki) 46 nM(Ki) 110 nM(Ki) 260 nM(Ki)
In vitro

A-674563 HCl se obtiene a partir de A-443654 reemplazando el indol por una porción fenilo y obteniendo actividad oral. A-674563 ralentiza la proliferación de células tumorales con una EC50 de 0,4 μM. A-674563 no inhibe la fosforilación de Akt per se, pero bloquea la fosforilación de los objetivos descendentes de Akt de manera dosis-dependiente. El bloqueo de Akt inducido por A-674563 resulta en una disminución de la fosforilación de los objetivos descendentes de las células STS y una inhibición del crecimiento de las células tumorales. A-674563 induce la detención del ciclo celular en G2 y la apoptosis en las células STS.

In vivo

A-674563 no muestra actividad inhibidora tumoral significativa en monoterapia; la eficacia de la terapia combinada mejora significativamente en comparación con la monoterapia. Los ratones tratados con A674563 (20 mg/kg/bid, p.o.) exhiben un crecimiento tumoral más lento y una disminución de más del 50% en el volumen tumoral al finalizar el estudio en comparación con el grupo control. Se ha identificado que A-674563 tiene un perfil farmacocinético drásticamente mejorado con una biodisponibilidad oral del 67% en ratones, pero es 70 veces menos activo que A-443654.

Características Compuesto biodisponible por vía oral (logrado reemplazando el indol de A-443654 con una porción fenilo) y algo menos selectivo para Akt sobre PKA que A-443654.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Ensayo de quinasa Akt

    El ensayo de quinasa utiliza His-Akt1 y un péptido Bad de ratón biotinilado como sustrato. El ensayo de quinasa se lleva a cabo a temperatura ambiente durante 30 minutos en 50 μL de tampón de reacción [20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,1% (p/v) Tritón X-100, 5 μM ATP (Km = 40 μM), 5 μM péptido (Km = 15 μM), 1 mM DTT, 60 ng de Akt1 y 0,5 μCi de [γ-33P]ATP] en presencia de diferentes concentraciones de A-674563. Cada reacción se detiene añadiendo 50 μL de tampón de terminación (0,1 M EDTA, pH 8,0, y 4 M NaCl). Los péptidos Bad biotinilados se inmovilizan en placas FLASH recubiertas de estreptavidina. Después de lavar con PBS-Tween 20 (0,05%), el fosfopéptido 33P capturado en las placas FLASH se mide con un contador γ TopCount Packard Instruments.
Ensayo celular:

[1]
  • Líneas celulares

    MiaPaCa-2 cells

  • Concentraciones

    0-30 μM

  • Tiempo de incubación

    48 hours

  • Método

    The cells on 96-well plates are gently washed with 200 μL of PBS. Alamar Blue reagent is diluted 1:10 in normal growth media. The diluted Alamar Blue reagent (100 M) is added to each well on the 96-well plates and incubated until the reaction is complete as per manufacturer's instructions. Analysis is done using an fmax Fluorescence Microplate Reader, set at the excitation wavelength of 544 nm and emission wavelength of 595 nm. Data are analyzed using SOFTmax PRO software provided by the manufacturer.
Estudio en animales:

[1]
  • Modelos animales

    Fasted mice

  • Dosificaciones

    20 or 100 mg/kg

  • Administración

    A-674563 is administered 30 minutes before the 1 g/kg glucose challenge.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15956255/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582381/
  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2932704/

Validación de productos por parte del cliente

<p>B cells were pre-treated with the indicated concentrations of A-674563 for 1h prior to R848 treatment (500 ng/ml).  Thymidine incorporation was analyzed 24h later.</p>

, 2012 , Lee lay hoon from National University of Singapore

<p>Akt1 and Akt2 isoforms are required for Wnt5a-induced RhoA activity. a, c Human osteosarcoma cells MG-63 (a) and U20S (c), serum-deprived for 24 h, were pre-treated with 10 nmol/L MK-2206 (Akt inhibitor) for 1 h, were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. The relative RhoA activity was normalized to the average value of LY294002/Wnt5a-untreated group. b, d Serum-deprived MG-63 (b) and U20S cells (d) were pre-treated with 10 nmol/L A-674563 (Akt1 inhibitor) and 10 nmol/L CCT128930 (Akt2 inhibitor) for 1 h, then were incubated with 100 ng/mL Wnt5a and harvested at 30 min after the start of Wnt5a treatment. Data were presented as mean ± SD of 3 determinations. The relative RhoA activity was normalized to the average value of each inhibitor-untreated group</p>

, , Cancer Cell Int, 2017, 17:27

Cell survival was determined using a WST-1 assay in the human lung cancer cells A549 A. and NCI-H358 B. following treatment with either an AKT1 specific inhibitor, A-674563 (black circle and line) or a pan-AKT inhibitor MK-2206 (gray square and line). *p < 0.05.

Datos de [ , , Oncotarget, 2016, 7(3):3297-316 ]

Sellecks A-674563 HCl Ha sido citado por 29 Publicaciones

Medium from human iPSC-derived primitive macrophages promotes adult cardiomyocyte proliferation and cardiac regeneration [ Nat Commun, 2025, 16(1):3012] PubMed: 40148355
Disruption of lysosomal nutrient sensing scaffold contributes to pathogenesis of a fatal neurodegenerative lysosomal storage disease [ J Biol Chem, 2024, 300(2):105641] PubMed: 38211816
Methionine adenosyltransferase2A inhibition restores metabolism to improve regenerative capacity and strength of aged skeletal muscle [ Nat Commun, 2023, 14(1):886] PubMed: 36797255
Functional restoration of lysosomes and mitochondria through modulation of AKT activity ameliorates senescence [ Exp Gerontol, 2023, 173:112091] PubMed: 36657533
Antagonistic effect of cyclin-dependent kinases and a calcium-dependent phosphatase on polyglutamine-expanded androgen receptor toxic gain of function [ Sci Adv, 2023, 9(1):eade1694] PubMed: 36608116
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Reducing Akt2 in retinal pigment epithelial cells causes a compensatory increase in Akt1 and attenuates diabetic retinopathy [ Nat Commun, 2022, 13-1:6045] PubMed: 36229454
Cyclin B/CDK1 and Cyclin A/CDK2 phosphorylate DENR to promote mitotic protein translation and faithful cell division [ Nat Commun, 2022, 13(1):668] PubMed: 35115540
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Akt isoforms differentially provide for chemoresistance in prostate cancer [ Cancer Biol Med, 2021, j.issn.2095-3941.2020.0747] PubMed: 34591413

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