U0126-EtOH

U0126-EtOH antagoniza funcionalmente la actividad transcripcional de AP-1 y bloquea la producción de una variedad de citocinas y metaloproteinasas implicadas en la respuesta inflamatoria. [1] Este compuesto inhibe la proliferación de linfocitos T en respuesta a la estimulación antigénica o a anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28 entrecruzados sin efecto sobre la proliferación inducida por IL-2 mediante la regulación a la baja de los niveles de ARNm de IL-2. [2] Un estudio reciente muestra que este químico antagoniza la apoptosis inducida por el resveratrol en células C4-2 de cáncer de próstata humano resistentes a la castración, inhibe la función mitocondrial y desplaza las células a la glucólisis aeróbica independientemente de MEK. [3]

U0126-EtOH, como inhibidor de la vía de señalización intracelular Raf/MEK/ERK, demuestra actividad antiviral al suprimir la propagación de la variante pandémica de 2009 del IV H1N1 y de los virus de la influenza aviar altamente patógenos (HPAIV) in vivo en el pulmón del ratón mediante la inhibición. [4] Este compuesto muestra un potencial efecto neuroprotector y mejora el aprendizaje espacial en el laberinto acuático de Morris (MWM) al activar el coactivador gamma del receptor activado por proliferadores de peroxisomas-1a, el factor respiratorio nuclear 1 y el factor de transcripción mitocondrial A en ratas inyectadas con Aβ. [5]

• Ensayos de quinasa in vitro

  La cantidad de MEK de tipo salvaje inmunoprecipitada utilizada en estos ensayos se ajusta para dar una cantidad similar de unidades de actividad a la obtenida con 10 nM de MEK recombinante. Las velocidades de reacción se miden utilizando un aparato de filtro de nitrocelulosa de 96 pocillos como se describe a continuación. A menos que se indique lo contrario, las reacciones se llevan a cabo a una concentración enzimática de 10 nM, en 20 mM Hepes, 10 mM MgCl₂, 5 mM β-mercaptoetanol, 0,1 mg/mL BSA, pH 7,4, a temperatura ambiente. Las reacciones se inician con la adición de [γ-³³P]ATP en la mezcla de reacción premezclada de MEK/ERK/este compuesto, y se toma una alícuota de 100 μL cada 6 minutos y se transfiere a la placa de membrana de nitrocelulosa de 96 pocillos que contiene 50 mM de EDTA para detener la reacción. La placa de membrana se aspira y se lava 4 veces con tampón bajo vacío. Luego, los pocillos se llenan con 30 μL de líquido de centelleo Microscint-20, y la radioactividad de la ERK fosforilada con ³³P se cuenta con un contador de centelleo Top Count. Las velocidades se obtienen a partir de las pendientes de las curvas de radioactividad frente al tiempo. Las concentraciones de ERK y ATP son 400 nM y 40 μM, respectivamente, a menos que se indique lo contrario. Para todos los ensayos enzimáticos in vitro, el porcentaje de inhibición se calcula 100 (1 −Vi/Vo) donde Vi y Vo son las velocidades de reacción iniciales en presencia y ausencia de este químico, respectivamente. Los datos se grafican luego como porcentaje de inhibición en función de la concentración de este compuesto y se ajustan, mediante regresión no lineal de mínimos cuadrados, a la ecuación estándar para una isoterma de Langmuir para determinar el IC50. Según lo informado, las concentraciones de enzimas se basan en los pesos moleculares y la masa de proteína utilizada en el volumen de ensayo final y no en la titulación del sitio activo. Por lo tanto, la concentración real del sitio activo de la enzima puede diferir de la informada.

• Líneas celulares

  A.E7 or Th17 cells

• Concentraciones

  0 to 10 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  A.E7 or Th17 cells are incubated with C-treated B10.BR or BALB/c splenocytes plus varying concentrations of pigeon cytochrome c or PR8 Ag, or with 5 U/mL human rIL-2. In addition, some assays contains U0126-EtOH or an inactive analogue, U0124, to determine direct effects of MEK inhibition on T cell proliferation. Two days after culture initiation, each well is pulsed with 1 µCi of [³H]TdR and harvested the following day. The incorporation of [³H]TdR into DNA is quantitated on a Packard Matrix 96 direct beta counter without the use of liquid scintillation mixtures.

• Modelos animales

  Female C57Bl/6 mice infected by Mouse-adapted highly pathogenic avian influenza A/FPV/Bratislava/79 (H7N7; FPV) virus and swine origin human influenza A virus (SOIV) A/Regensburg/D6/2009 (H1N1v; RB1).

• Dosificaciones

  ≤10 mM

• Administración

  Administered via aerosol.