Temsirolimus (CCI-779)

N.º de catálogoS1044 Lote:S104451

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Datos técnicos

Fórmula

C56H87NO16
Peso molecular 1030.29 Número CAS 162635-04-3
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (97.06 mM)
Ethanol 100 mg/mL (97.06 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción El Temsirolimus es un inhibidor específico de mTOR con una IC50 de 1,76 μM en un ensayo sin células. El Temsirolimus induce Autophagy y Apoptosis.
Objetivos
mTOR
(Cell-free assay)
1.76 μM
In vitro En ausencia de FKBP12, Temsirolimus inhibe potentemente la actividad de la quinasa mTOR con una IC50 de 1,76 μM, similar a la de la rapamicina con una IC50 de 1,74 μM. Este tratamiento compuesto a concentraciones nanomolares (10 nM a <5 μM) muestra una actividad antiproliferativa modesta y selectiva a través de un mecanismo dependiente de FKBP12, pero puede inhibir completamente la proliferación de un amplio panel de células tumorales a bajas concentraciones micromolares (5-15 μM), implicando la supresión de la señalización mTOR independiente de FKBP12. Este tratamiento químico a concentraciones micromolares pero no nanomolares (20 μM) causa una disminución marcada en la síntesis global de proteínas y el desensamblaje de polirribosomas, acompañado de un rápido aumento en la fosforilación del factor de elongación de la traducción eEF2 y el factor de iniciación de la traducción eIF2A. Inhibe la fosforilación de la proteína ribosomal S6, más potentemente en células DU145 PTEN-positivas que en células PC-3 PTEN-negativas, e inhibe el crecimiento celular y la supervivencia clonogénica de ambas células de manera concentración-dependiente. Este compuesto (100 ng/mL) inhibe potentemente la proliferación e induce apoptosis en células primarias de leucemia linfoblástica aguda (LLA) humana.
In vivo En los modelos de xenoinjerto NOD/SCID con ALL humana, el tratamiento con Temsirolimus a 10 mg/kg/día produce una disminución de los blastos de sangre periférica y de la esplenomegalia . La administración de este compuesto (20 mg/kg i.p. 5 días/semana) retrasa significativamente el crecimiento de los xenoinjertos DAOY en un 160% después de 1 semana y un 240% después de 2 semanas, en comparación con los controles. Una dosis alta única de este químico (100 mg/kg i.p) induce una regresión del 37% del volumen tumoral en 1 semana. El tratamiento con este compuesto durante 2 semanas también retrasa el crecimiento de los xenoinjertos U251 resistentes a la rapamicina en un 148%. La inhibición de mTOR por este agente mejora el rendimiento en cuatro tareas conductuales diferentes y disminuye la formación de agregados en un modelo de ratón de la enfermedad de Huntington. La administración de este compuesto induce respuestas antitumorales significativas y dependientes de la dosis contra el crecimiento subcutáneo de los xenoinjertos 8226, OPM-2 y U266 con ED50 de 20 mg/kg y 2 mg/kg para 8226 y OPM-2, respectivamente, que se asocian con la inhibición de la proliferación y la angiogénesis, la inducción de apoptosis y la reducción del tamaño de las células tumorales.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Ensayo in vitro de la actividad catalítica de mTOR

    Los constructos de ADN de mTOR humano de tipo salvaje con etiqueta Flag (Flag-mTOR) se transfectan transitoriamente en células HEK293. La extracción de proteínas y la purificación de Flag-mTOR se realizan 48 horas después. Los ensayos de quinasa in vitro de Flag-mTOR purificado en presencia de diversas concentraciones de Temsirolimus sin FKBP12 se realizan en placas de 96 pocillos y se detectan mediante inmunoensayo fluorescente de lantánidos con mejora de la disociación (DELFIA) utilizando His6-S6K1 como sustrato. Las enzimas se diluyen primero en tampón de ensayo de quinasa (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM microcistina LR y 100 μg/mL BSA). En cada pocillo, se mezclan brevemente 12 μL de la enzima diluida con 0,5 μL de este compuesto. La reacción de la quinasa se inicia añadiendo 12,5 μL de tampón de ensayo de quinasa que contiene ATP y His6-S6K para obtener un volumen de reacción final de 25 μL que contiene 800 ng/mL de FLAG-mTOR, 100 μM de ATP y 1,25 μM de His6-S6K. La placa de reacción se incuba durante 2 horas (lineal a 1-6 horas) a temperatura ambiente con agitación suave y luego se detiene añadiendo 25 μL de tampón de parada (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA y 20 mM EGTA). La detección DELFIA del His6-S6K fosforilado (Thr-389) se realiza a temperatura ambiente utilizando un anticuerpo monoclonal anti-P(T389)-p70S6K marcado con Europio-N1-ITC (Eu) (10,4 Eu por anticuerpo). Se transfieren 45 μL de la mezcla de reacción de quinasa terminada a una placa MaxiSorp que contiene 55 μL de PBS. Se deja que el His6-S6K se una durante 2 horas, después de lo cual los pocillos se aspiran y se lavan una vez con PBS. Se añaden 100 μL de tampón DELFIA con 40 ng/mL de anticuerpo Eu-P(T389)-S6K. La unión del anticuerpo continúa durante 1 hora con agitación suave. Los pocillos se aspiran y se lavan cuatro veces con PBS que contiene 0,05% de Tween 20 (PBST). Se añaden 100 μL de solución de mejora DELFIA a cada pocillo y las placas se leen en un lector de placas modelo Victor de PerkinElmer.
Ensayo celular:

[1]
  • Líneas celulares

    A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, and PC3-MM2

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~20 μM

  • Tiempo de incubación

    72 hours

  • Método

    Cells are exposed to various concentrations of Temsirolimus for 72 hours. After treatment, viable cell densities are determined by MTS dye conversion using CellTiter AQ assay kit.
Estudio en animales:

[4]
  • Modelos animales

    Female athymic nude mice injected s.c. with DAOY, or U251 cells

  • Dosificaciones

    20 mg/kg

  • Administración

    Injection daily 5 times per week

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18413763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15805283/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16195324/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11245461/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146184/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15304393/

Validación de productos por parte del cliente

mTOR inhibitors attenuate ganetespib-driven elevation of HSPs in multiple tumor cell types. A375 melanoma cells were treated with vehicle, ganetespib (25 nmol/L), BEZ235 (500 nmol/L), or temsirolimus (500 nmol/L), either alone or in combination, for 24 hours. The levels of HSP90α, HSP70, HSP27, and GAPDH were determined by immunoblotting.

Datos de [ Mol Cancer Res , 2014 , 12, 703-13 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered 25 mg/kg erlotinib once daily for 4 days or 50 mg/kg temsirolimus once from day 8. Four hours after final erlotinib administration, tumors were harvested, and the relative levels of proteins in the tumor lysates were determined by western blotting.

Datos de [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered as described in Figure. Four hours after final administration of erlotinib, tumors were harvested, and tumor cell angiogenesis (CD31) were determined by immunohistochemistry.

Datos de [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of Temsirolimus for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Temsirolimus (CCI-779) Ha sido citado por 108 Publicaciones

Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Multi-layer stratified oncology platform utilizing transcriptomics, prostate cancer organoids, and modeling of drug response [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):290] PubMed: 41094672
PI3K/AKT signaling mediates stress-inducible amyloid formation through c-Myc [ Cell Rep, 2025, 44(5):115617] PubMed: 40272983
Lactate shuttle between cytotrophoblast and syncytiotrophoblast in the placenta enhances ferroptosis resistance and maintains placental homeostasis: implications for early pregnancy loss [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):438] PubMed: 41088442
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A high-throughput screening platform to identify MYCN expression inhibitors for liver cancer therapy [ Front Oncol, 2025, 15:1486671] PubMed: 40027135
Single-Molecule-Based, Label-Free Monitoring of Molecular Glue Efficacies for Promoting Protein-Protein Interactions Using YaxAB Nanopores [ ACS Nano, 2024, 18(45):31451-31465] PubMed: 39482865
The mTOR pathway controls phosphorylation of BRAF at T401 [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):428] PubMed: 39223665
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Enzymatic depletion of circulating glutamine is immunosuppressive in cancers [ iScience, 2024, 27(6):109817] PubMed: 38770139

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