TW-37

TW-37 se dirige al surco de unión a BH3 en Bcl-2 donde se unen las proteínas proapoptóticas Bcl-2, y muestra una mayor afinidad y selectividad por Bcl-2 y Mcl-1 sobre Bcl-xL con valores de Ki de 0,29 μM, 0,26 μM y 1,11 μM, respectivamente. [1] In vitro, este compuesto muestra un efecto antiproliferativo y proapoptótico significativo en una línea celular de linfoma WSU-DLCL2 quimiorresistente de novo y en células primarias obtenidas de un paciente con linfoma sin efectos sobre los linfocitos de sangre periférica normales. [1] Exhibe un efecto inhibidor tanto en el crecimiento celular como en la muerte celular en células endoteliales con una IC50 de aproximadamente 1,8 μM sin efecto sobre los fibroblastos expuestos al mismo rango de concentración que las células endoteliales. Además, este químico también muestra efectos antiproliferativos en las líneas celulares tumorales MCF-7, LNCaP y SLK con el mismo o menor rango de concentración que los requeridos para inhibir el crecimiento de células endoteliales. [2]

TW-37 muestra una dosis máxima tolerada (DMT) de 40 mg/kg para tres inyecciones i.v. en ratones con inmunodeficiencia combinada grave (SCID) cuando se administra solo, y mejora el efecto inhibidor tumoral del régimen CHOP. [1] Este compuesto, administrado por vía i.v., produce un efecto antiangiogénico al disminuir la densidad de microvasos humanos funcionales en el modelo de ratón SCID de angiogénesis humana. [2] La combinación de este químico e inhibidores de MEK bloquea sinérgicamente el crecimiento de células de melanoma en ratones mediante una reducción significativa en el volumen y la masa tumoral. [3]

• Ensayo de unión basado en polarización de fluorescencia para proteínas recombinantes Bcl-2, Bcl-XL y Mcl-1

  Para este ensayo, se emplean el péptido BH3 de 21 residuos QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR derivado de Bid marcado con FAM-Bid y proteínas recombinantes derivadas de Bcl-2 humana, Bcl-X L y Mcl-1. Se determina que FAM-Bid tiene una K_i de 11 nM para la proteína Bcl-2, 25 nM para la proteína Bcl-XL y 5,7 nM para la proteína Mcl-1. El ensayo de unión competitiva para Bcl-XL es el mismo que para Bcl-2 con las siguientes excepciones: 30 nM de proteína Bcl-XL y 2,5 nM de péptido FAM-Bid en el siguiente tampón de ensayo [50 mM Tris-Bis (pH 7,4) y 0,01% de gamma-globulina bovina].

• Líneas celulares

  HDMECs

• Concentraciones

  0 - 100 μM

• Tiempo de incubación

  96 hours

• Método

  The sulforhodamine B (SRB) cytotoxicity assay is used as described. Briefly, optimal cell density for cytotoxicity assay is determined by growth curve analysis. HDMECs are seeded in a 96-well plate and allowed to adhere overnight. Drug or control is diluted in EGM2-MV and layered onto cells, which are allowed to incubate for times as indicated in the figures. Alternatively, HDMECs are coincubated with TW37 and 0 to 100 ng/mL recombinant human VEGF (rhVEGF)165 or 0 to 100 ng/mL recombinant human CXCL8. Cells are fixed on the plates by addition of cold trichloroacetic acid (10% final concentration) and incubation for 1 hour at 4 °C. Cellular protein is stained by addition of 0.4% SRB in 1% acetic acid and incubation at room temperature for 30 minutes. Unbound SRB is removed by washing with 1% acetic acid and the plates are air dried. Bound SRB is resolubilized in 10 mM unbuffered Tris-base and absorbance is determined on a microplate reader at 560 nm. Test results are normalized against initial plating density and drug-free controls. Data are obtained from triplicate wells per condition and are representative of at least three independent experiments

• Modelos animales

  Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts

• Dosificaciones

  ~40 mg/kg

• Administración

  Administered via i.v. or i.p.