Sorafenib Tosylate (BAY 43-9006)

Sorafenib tosylate inhibe la actividad de B-Raf tanto de tipo salvaje como mutante V599E con una IC50 de 22 nM y 38 nM, respectivamente. Este compuesto también inhibe potentemente mVEGFR2 (Flk-1), mVEGFR3, mPDGFRβ, Flt3 y c-Kit con una IC50 de 15 nM, 20 nM, 57 nM, 58 nM y 68 nM, respectivamente. Inhibe débilmente FGFR-1 con una IC50 de 580 nM. Este químico no es activo contra ERK-1, MEK-1, EGFR, HER-2, IGFR-1, c-Met, PKB, PKA, cdk1/cyclinB, PKCα, PKCγ y pim-1. Inhibe marcadamente la fosforilación de VEGFR2 en células NIH 3T3 con una IC50 de 30 nM, y la fosforilación de Flt-3 en células HEK-293 con una IC50 de 20 nM. Bloquea potentemente la fosforilación de MEK 1/2 y ERK 1/2 en la mayoría de las líneas celulares, pero no en las células A549 o H460, mientras que no tiene efecto sobre la inhibición de la vía PKB. Inhibe la proliferación de células HAoSMC y MDA-MB-231 con una IC50 de 0,28 μM y 2,6 μM, respectivamente. [1] Además de la inhibición de la vía de señalización RAF/MEK/ERK, inhibe significativamente la fosforilación de eIF4E y disminuye los niveles de Mcl-1 en células de carcinoma hepatocelular (HCC) de manera independiente de MEK/ERK. Inhibe la proliferación de células PLC/PRF/5 y HepG2 con una IC50 de 6,3 μM y 4,5 μM, respectivamente, y conduce a una inducción significativa de apoptosis. [2]

La administración oral de Sorafenib tosylate (~60 mg/kg) demuestra una actividad antitumoral de amplio espectro y dependiente de la dosis contra una variedad de modelos de xenoinjertos tumorales humanos, incluyendo MDA-MB-231, Colo-205, HT-29, DLD-1, NCI-H460 y A549, sin evidencia de toxicidad. En asociación con la eficacia antitumoral, el tratamiento con este compuesto inhibe potentemente la fosforilación de MEK 1/2 y los niveles de pERK 1/2 en xenoinjertos HT-29 y MDA-MB-231, pero no en xenoinjertos Colo-205, y suprime significativamente el área de microvasos tumorales (MVA) y la densidad de microvasos (MVD) en xenoinjertos tumorales MDA MB-231, HT-29 y Colo-205. [1] Este tratamiento con este compuesto produce una inhibición del crecimiento dependiente de la dosis de xenoinjertos tumorales PLC/PRF/5 en ratones SCID con TGI del 49% y 78% a 10 mg/kg y 30 mg/kg, respectivamente, lo que es consistente con la inhibición de la fosforilación de ERK y eIF4E, la reducción del área de microvasos y la inducción de la apoptosis de las células tumorales. [2]

• Ensayos bioquímicos

  Los baculovirus recombinantes que expresan Raf-1 (residuos 305-648) y B-Raf (residuos 409-765) se purifican como proteínas de fusión. MEK-1 humano de longitud completa se genera por PCR y se purifica como una proteína de fusión a partir de lisados de Escherichia coli. Sorafenib tosylate se añade a una mezcla de Raf-1 (80 ng), o B-Raf (80 ng) con MEK-1 (1 μg) en tampón de ensayo [20 mM Tris (pH 8.2), 100 mM NaCl, 5 mM MgCl₂, y 0.15% β-mercaptoetanol] a una concentración final de 1% DMSO. El ensayo de la quinasa Raf (volumen final de 50 μL) se inicia añadiendo 25 μL de 10 μM γ[³³P]ATP (400 Ci/mol) y se incuba a 32 °C durante 25 minutos. El MEK-1 fosforilado se recolecta por filtración en una alfombrilla de fosfocelulosa, y se utiliza 1% de ácido fosfórico para eliminar la radioactividad no unida. Después de secar por calentamiento con microondas, se utiliza un contador de placa β para cuantificar la radioactividad unida al filtro. El dominio quinasa de VEGFR2 (KDR) humano se expresa y purifica a partir de lisados de Sf9. Los ensayos de transferencia de energía por fluorescencia resuelta en el tiempo para VEGFR2 se realizan en placas opacas de 96 pocillos en el formato de transferencia de energía por fluorescencia resuelta en el tiempo. Las condiciones finales de reacción son las siguientes: 1 a 10 μM ATP, 25 nM poli GT-biotina, 2 nM anticuerpo fosfo (p)-Tyr marcado con Europio (PY20), 10 nM APC, 1 a 7 nM de dominio quinasa citoplasmático en concentraciones finales de 1% DMSO, 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 0.1 mM EDTA, 0.015% Brij-35, 0.1 mg/mL BSA, y 0.1% β-mercaptoetanol. Los volúmenes de reacción son de 100 μL y se inician con la adición de la enzima. Las placas se leen a 615 y 665 nM en un contador Perkin-Elmer VictorV Multilabel aproximadamente 1.5 a 2.0 horas después del inicio de la reacción. La señal se calcula como una relación: (665 nm/615 nM) × 10.000 para cada pocillo. Para la generación de IC50, este compuesto se añade antes del inicio de la enzima. Se prepara una placa madre 50x con este químico diluido en serie 1:3 en una solución de 50% DMSO/50% agua destilada. Las concentraciones finales de este compuesto varían de 10 μM a 4.56 nM en 1% DMSO.

• Líneas celulares

  MDA-MB-231, and HAoSMC

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cells are exposed to increasing concentrations of Sorafenib tosylate for 72 hours. Cell number is quantitated using the Cell TiterGlo ATP Luminescent assay kit. This assay measures the number of viable cells per well by measurement of luminescent signal based on amount of cellular ATP.

• Modelos animales

  Female NCr-nu/nu mice implanted s.c. with MDA-MB-231, Colo-205, HT-29, H460, or A549 cells

• Dosificaciones

  ~60 mg/kg

• Administración

  Orally once daily