SRT1720 HCl

La relación de activación máxima de SRT1720 frente a los homólogos de Sirtuin más cercanos, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) y SIRT3 (EC1.5 > 300 μM) es de hasta el 781 %. SRT1720 se une al complejo enzima-péptido sustrato de SIRT1 en un sitio alostérico amino-terminal al dominio catalítico y reduce la constante de Michaelis para los sustratos acetilados. SRT1720 podría reducir los niveles de glucosa después de comer. SRT1720 no tiene efecto sobre la glucosa en ayunas en ratones alimentados con dieta estándar, lo que revela que la activación farmacológica de SIRT1 es poco probable que induzca hipoglucemia. SRT1720 reduce significativamente la hiperinsulinemia después de 4 semanas, normalizando parcialmente los niveles elevados de insulina. El tratamiento con SRT1720 aumenta la capacidad mitocondrial en un 15 % en el músculo gastrocnemio, medido por la actividad de la citrato sintasa. [1] Concentraciones más altas de SRT1720 (15 μM) inducen una disminución modesta (10-20 %) en la viabilidad celular normal. SRT1720 también inhibe significativamente la migración de células de mieloma múltiple dependiente de VEGF. [2]

En ratones DIO, SRT1720 imita varios de los efectos observados después de la restricción calórica, incluida la mejora de la sensibilidad a la insulina, la normalización de los niveles de glucosa e insulina y el aumento de la capacidad mitocondrial. Además, en ratones obesos inducidos por la dieta y genéticamente obesos, SRT1720 mejora la sensibilidad a la insulina, reduce la glucosa plasmática y aumenta la capacidad mitocondrial. Por lo tanto, SRT1720 es un nuevo agente terapéutico prometedor para el tratamiento de enfermedades del envejecimiento como la diabetes tipo 2. En consonancia con una mejor tolerancia a la glucosa, la tasa de infusión de glucosa necesaria para mantener la euglicemia es aproximadamente un 35 % más alta en ratas fa/fa tratadas con SRT1720, y la tasa total de eliminación de glucosa aumenta aproximadamente un 20 %. [1] SRT1720 también previene el crecimiento tumoral del mieloma múltiple. 

• Ensayo de polarización de fluorescencia SIRT1

  En el ensayo FP de SIRT1, la actividad de SIRT1 se monitoriza utilizando un péptido de 20 aminoácidos (Ac-Glu-Glu-Lys(biotin)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 o Tamra)-Glu-Glu-NH₂) derivado de la secuencia de p53. El péptido está unido N-terminalmente a biotina y modificado C-terminalmente con una etiqueta fluorescente. La reacción para monitorizar la actividad enzimática es un ensayo enzimático acoplado donde la primera reacción es la reacción de desacetilación catalizada por SIRT1 y la segunda reacción es la escisión por tripsina en el residuo de lisina recién expuesto. La reacción se detiene y se añade estreptavidina para acentuar las diferencias de masa entre el sustrato y el producto. La sensibilidad del ensayo FP permite la identificación de SRT1720. Las condiciones de la reacción de polarización de fluorescencia son las siguientes: 0,5 μM de sustrato peptídico, 150 μM de βNAD⁺, 0-10 nM de SIRT1, 25 mM de Tris-acetato pH 8, 137 mM de Na-Ac, 2,7 mM de K-Ac, 1 mM de Mg-Ac, 0,05 % de Tween-20, 0,1 % de Pluronic F127, 10 mM de CaCl 2, 5 mM de DTT, 0,025 % de BSA y 0,15 mM de nicotinamida. La reacción se incuba a 37 °C y se detiene añadiendo nicotinamida, y se añade tripsina para escindir el sustrato desacetilado. Esta reacción se incuba a 37 °C en presencia de 1 μM de estreptavidina. La polarización fluorescente se determina a longitudes de onda de excitación (650 nm) y emisión (680 nm).

• Líneas celulares

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Concentraciones

  5 μM

• Tiempo de incubación

  2 hours

• Método

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Modelos animales

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Dosificaciones

  200 mg/kg

• Administración

  Orally