NSC 74859 (S3I-201)

NSC 74859 (S3I-201) inhibe el crecimiento e induce la apoptosis preferentemente en células tumorales que contienen Stat3 activada persistentemente al inhibir la formación del complejo Stat3·Stat3 y las actividades de unión al ADN y transcripcionales de Stat3. Además, también inhibe la expresión de los genes regulados por Stat3 que codifican ciclina D1, Bcl-xL y survivina. [1] Este compuesto inhibe las líneas celulares de carcinoma de mama MDA-MB-435, MDA-MB-453 y MDA-MB-231 con una IC50 de 100 μM. Además, las células con señalización de TGF-β deteriorada son cuatro veces más sensibles a S3I-201. [2] Un estudio reciente muestra que potencia el efecto antiproliferativo en células HepG2 y Huh-7 a través de la vía de señalización STAT3. [3]

NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, i.v. cada 2 o cada 3 días) muestra la eficacia antitumoral en modelos de ratón con xenoinjertos de tumores de mama humanos que albergan Stat3 constitutivamente activa. [1] Este tratamiento con el compuesto reduce la replicación del virus de la varicela-zóster (VZV) basándose en la señal de bioluminiscencia y el número de xenoinjertos cutáneos positivos en comparación con los ratones tratados con DMSO al inhibir la fosforilación de STAT3. [4]

• Ensayo de unión de ADN de Stat3 in vitro y análisis EMSA

  Brevemente, 100 mL de biotinil-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (en 50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7.5) se añaden a cada pocillo de placas de microtitulación de 96 pocillos recubiertas con estreptavidina y se incuban con agitación a 4 °C durante la noche. Luego las placas se enjuagan con PBS/Tween 20 y luego dos veces con 200 mL de BSA-T-PBS (0.2% BSA/0.1% Tween 20/PBS). Luego se añaden 50 mL de proteína de fusión Lck-SH2-GST (6.4 ng/ml en BSA-T-PBS) a cada pocillo de la placa de 96 pocillos en presencia y ausencia de 50 mL de NSC 74859 (S3I-201) (para concentraciones finales de 30 y 100 mM), y la placa se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. Después de retirar las soluciones, cada pocillo se enjuaga cuatro veces con BSA-T-PBS (200 mL), y se añaden 100 mL de anticuerpo policlonal anti-GST de conejo (100 ng/mL en BSA-T-PBS) a cada pocillo y se incuban a 4 °C durante la noche. Después de lavar con BSA-T-PBS, se añaden 100 mL de anticuerpo de ratón anti-conejo conjugado con peroxidasa de rábano picante de BSA-T-PBS de 200 ng/mL a cada pocillo y se incuban durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de cuatro pasos de lavado con BSA-T-PBS y tres pasos de lavado con PBS-T, se añaden 100 mL de sustrato de peroxidasa a cada pocillo y se incuban durante 5-15 minutos. La reacción de peroxidasa se detiene añadiendo 100 mL de solución de ácido sulfúrico 1 M, y la absorbancia se lee a 450 nm con un lector de placas ELISA.

• Líneas celulares

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• Concentraciones

  ~ 250 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• Modelos animales

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• Dosificaciones

  ≤5 mg/kg

• Administración

  Administered via i.v.