RAF265 (CHIR-265)

N.º de catálogoS2161 Lote:S216102

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Datos técnicos

Fórmula

C24H16F6N6O
Peso molecular 518.41 Número CAS 927880-90-8
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 33 mg/mL (63.65 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción RAF265 (CHIR-265) es un potente inhibidor selectivo de C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E con una IC50 de 3-60 nM, y exhibe una potente inhibición de la fosforilación de VEGFR2 con una EC50 de 30 nM en ensayos sin células. Este compuesto induce la detención del ciclo celular y la apoptosis. Fase 2.
Objetivos
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
In vitro RAF265 (CHIR-265) inhibe C-Raf, B-Raf de tipo salvaje y B-Raf mutante (V600E). Este compuesto bloquea eficazmente la fosforilación de los sustratos aguas abajo de Raf, MEK y ERK en las células, y también mata las líneas celulares de melanoma y cáncer colorrectal que albergan mutaciones de B-Raf independientemente del estado de mutación de PTEN. La inhibición de la cinasa Raf por este agente en líneas celulares de melanoma con mutación de B-Raf causa la detención del ciclo celular e induce la apoptosis, imitando el efecto de la ARN interferente de Raf en estas células. También inhibe potentemente la fosforilación de VEGFR2 y la proliferación de hMVEC estimuladas por VEGF. En células HT29 y MDAMB231, esta sustancia química muestra actividad inhibidora con una IC20 de 1 a 3 μM y una IC50 de 5 a 10 μM, respectivamente. Si bien conduce a una disminución significativa de la supervivencia clonogénica en todas las líneas celulares probadas, lo que significa que este compuesto induce un efecto dominante sobre la supervivencia clonogénica. La adición de este agente a RAD001 en células HCT116 podría conducir a una fosforilación moderadamente disminuida de AKT, proteína S6 y 4EBP1. Reduce notablemente el nivel de proteína Bcl-2 y es muy inhibidor en células CM y NCI-H727, sin tener efecto sobre la susceptibilidad al TRAIL de las células BON1 y GOT1. La proteína cinasa D3 (PRKD3) que, cuando se silencia, podría mejorar la muerte celular por este compuesto en células de melanoma A2058, lo que previene la reactivación de la señalización MAPK, induce la escisión de PARP, aumenta la actividad de la caspasa, interrumpe la progresión del ciclo celular e inhibe la formación de colonias.
In vivo RAF265 (CHIR-265) muestra un TVI% (porcentaje de inhibición del volumen tumoral) del 71% al 72% en xenoinjertos HCT116 a 12 mg/kg. Mientras que la combinación de este compuesto y RAD001 muestra una actividad antitumoral mejorada con un aumento de T10 (tiempo para alcanzar un volumen tumoral relativo de 10 veces el volumen tumoral inicial) y un retraso del crecimiento tumoral. La combinación de RAD001 y esta sustancia química también mejora significativamente la activación de la caspasa-3 en xenoinjertos HCT116 y MDAMB231, pero no en A549. Este compuesto inhibe la acumulación de FDG (2-desoxi-2-[18F]fluoro-d-glucosa) y disminuye los volúmenes tumorales en xenoinjertos A375M con una dosis oral de 100 mg/kg.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Protocolo de Ensayo

    Raf y Mek se combinan a 2 × concentraciones finales en tampón de ensayo (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA y 1 mM DTT) y se dispensan 15 μL por pozo en placas de ensayo de polipropileno. Los niveles de fondo se determinan en pozos que contienen Mek y DMSO sin Raf. A los pozos que contienen Raf/Mek se añaden 3 μL de 10 × de este compuesto diluido en 100% DMSO. La reacción de actividad de la cinasa raf se inicia con la adición de 12 μL por pozo de 2,5 × 33P-ATP diluido en tampón de ensayo. Después de 45-60 minutos, las reacciones se detienen con la adición de 70 μL de reactivo de parada (30 mM EDTA). Las placas de filtración se prehumedecen durante 5 minutos con etanol al 70% y luego se enjuagan por filtración con tampón de lavado. Las muestras (90 μL) de los pozos de reacción se transfieren luego a las placas de filtración. Las placas de filtración se lavan 6 × con tampón de lavado utilizando un aparato de filtración Millipore. Las placas se secan y se añaden 100 μL por pozo de líquido de centelleo. El CPM se determina luego utilizando un lector Wallac Microbeta 1450.
Ensayo celular:[2]
  • Líneas celulares

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • Concentraciones

    0.1 - 10 μM

  • Tiempo de incubación

    48 hours

  • Método

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
Estudio en animales:[2]
  • Modelos animales

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • Dosificaciones

    12 mg/kg

  • Administración

    Orally administered daily

Referencias

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Validación de productos por parte del cliente

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

Datos de [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

Datos de [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

Datos de [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

Datos de [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) Ha sido citado por 24 Publicaciones

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

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