Pelitinib (EKB-569)

N.º de catálogoS1392 Lote:S139201

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Datos técnicos

Fórmula

C24H23ClFN5O2
Peso molecular 467.92 Número CAS 257933-82-7
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 13 mg/mL (27.78 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Pelitinib (EKB-569) es un potente inhibidor irreversible de EGFR con una IC50 de 38,5 nM. Este compuesto también inhibe ligeramente Src, MEK/ERK y ErbB2 con IC50s de 282 nM, 800 nM y 1255 nM, respectivamente. Fase 2.
Objetivos
EGFR Src MEK/ERK ErbB2 Raf
38.5 nM 282 nM 800 nM 1.255 μM 3.353 μM
In vitro Pelitinib (EKB-569) muestra una actividad inhibitoria mucho mayor contra EGFR, en comparación con c-erbB-2 estrechamente relacionado, así como otras quinasas como Src, Cdk4, c-Met, Raf y MEK/ERK, con una IC50 que va desde 282 nM para Src hasta >20 μM para Cdk4. Consistentemente, el tratamiento con este compuesto inhibe significativamente la autofosforilación de EGFR pero no de c-Met en células A431. Inhibe potentemente la proliferación de queratinocitos humanos normales (NHEK), así como de células tumorales A431 y MDA-468 con IC50 de 61 nM, 125 nM y 260 nM, respectivamente, mientras que muestra poca actividad contra células MCF-7 con una IC50 de 3,6 μM. Este químico inhibe la fosforilación de EGFR inducida por EGF en células A431 y NHEK con una IC50 de 20-80 nM, así como la fosforilación de STAT3 con una IC50 de 30-70 nM. A 75-500 nM, también inhibe específicamente la activación de AKT y ERK1/2, sin afectar la vía NF-κB. En células NHEK, este compuesto también inhibe potentemente la activación de EGFR mediada por TGF-α con una IC50 de 56 nM, así como la activación de STAT3 y ERK1/2 con IC50 de 60 nM y 62 nM, respectivamente.
In vivo Una dosis oral única de 10 mg/kg de Pelitinib (EKB-569) inhibe potentemente la fosforilación de EGFR en xenoinjertos A431 con EGFR sobreexpresado, en un 90% dentro de 1 hora, y en >50% después de 24 horas. La administración de este compuesto a 20 mg/kg/día inhibe la tumorigénesis en ratones APCMin/+ en un 87%, lo que equivale al efecto de 2 dosis de EKI-785 (40 mg/kg/día), lo que es consistente con una mayor potencia in vivo. Este químico inhibe selectivamente la señalización de EGFR en células epiteliales de las vías respiratorias in vivo. En el modelo de ratón de remodelación epitelial de las vías respiratorias que es inducible por infección viral y presenta un cambio tardío pero permanente a metaplasia de células caliciformes, el tratamiento con este compuesto a 20 mg/kg/día corrige los 3 aspectos del remodelado epitelial, bloqueando completamente el aumento de células ciliadas y la disminución de células de Clara, e inhibiendo significativamente la metaplasia de células caliciformes.
Características Una versión mejorada de EKI-785.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[1]
  • Autofosforilación de EGFR en células

    Para experimentos con células en cultivo, las células A431 se tratan con diversas concentraciones de Pelitinib (EKB-569) durante 2,75 horas antes de la co-incubación con 100 ng/mL de EGF durante 0,25 horas. Las células se lavan dos veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) fría antes de añadirles tampón de lisis (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% desoxicolato de sodio, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatina A, 10 mg/mL leupeptina, 20 KIU/mL aprotinina, 2 mM ortovanadato de sodio y 100 mM fluoruro de sodio) durante 20 minutos en hielo, antes de la inmunoprecipitación y el SDS-PAGE-inmunoblotting. Para la inmunoprecipitación, las células cultivadas se colocan en tampón de lisis frío y se homogeneizan inmediatamente en hielo con un Polytron con varios pulsos. El homogeneizado se centrifuga primero a 2500 rpm (20 minutos, 4 °C) y luego de nuevo a 14.000 rpm en una microcentrífuga (10 minutos, 4 °C). Los sobrenadantes (1000 μg de proteína) se incuban durante 2 horas a 4 °C con 15 mL de anticuerpo policlonal anti-EGFR. Después de 2 horas, se añaden 50 μL de perlas de agarosa de proteína G plus/proteína A y se incuban con rotación constante durante 2 horas a 4 °C. Después de lavar con tampón de lisis, las perlas se hierven durante 2 minutos en tampón de muestra de Laemmli. Luego, las proteínas se resuelven mediante SDS-PAGE, se transfieren a una membrana de inmobilón y se sondea durante la noche con un anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP). Las membranas se revelan utilizando el reactivo ECL. La proteína EGFR total se determina despojando las membranas y volviendo a sondear con anticuerpos específicos del receptor. La cuantificación de las bandas se realiza por densitometría, utilizando el software ImageQuant con un escáner de transmitancia láser Molecular Dynamics.
Ensayo celular:

[2]
  • Líneas celulares

    NHEK, A431, MCF-7, and MDA-468

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Tiempo de incubación

    5 days

  • Método

    Cells are seeded in 96-well dishes, and after 2 hours, Pelitinib (EKB-569) is added and incubated for 5 days. After incubation, the medium is removed from each well and fresh medium (150 μL) + 1 mg/mL MTT solution (50 μL) is added. After incubation for 2 hours at 37 °C, the medium is replaced with 150 μL DMSO, and absorbance at 540 nm in each well is determined. The IC50 is calculated by linear regression of the data.
Estudio en animales:

[1]
  • Modelos animales

    Athymic nu/nu female mice bearing subcutaneous A431 tumors, or APCMin/+ male mice, a murine model of human familial adenomatous polyposis (FAP)

  • Dosificaciones

    10, or 20 mg/kg/day

  • Administración

    Oral gavage

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10973323/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14749472/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16453019/

Validación de productos por parte del cliente

HBMEC were preincubated with the indicated concentrations of either ErB1/2/4 inhibitor (Pelitinib; EKB-569), and cells were then infected for 4 h with the unencapsulated strain, MC58 siaD. The numbers of adherent (black bars) and invasive (gray bars) bacteria were determined in a gentamicin protection assay. The graphs show the percentages of adhesion and invasion of inhibitor-treated cells, relative to control cells (means 盨D of three independent experiments performed in duplicate). *, P < 0.05.

Datos de [ Infect Immun , 2014 , 82(3), 1243-55 ]

<p>IGF-1 and IL-1β mediated induction of Bcl-2 expression involves EGFR.   (A)  Bcl-2 mRNA levels in AALEBs treated with IGF-1 or IL-1β in the presence or absence of two EGFR tyrosine kinase inhibitors, EKB-569 (1 μM) or PD153035 (1 μM). </p>

Datos de [ J Immunol , 2012 , 188, 4581-4589 ]

Immunofluorescence Assay. PDCD4, GRA3, and overlapping are represented in red, green, and yellow, respectively. Group I TKIs sunitinib and AZD9291 show similar results to that of the negative control with PDCD4 and GRA3 well localized inside the nuclei. Mild disruption of PDCD4 in the nuclei is observed with Group II TKIs gefitinib, erlotinib, and AG1478. Group III TKIs neratinib, afatinib, and pelitinib show comparable changes to that of pyrimethamine 5 μM, with complete disruption of PDCD4 and GRA3, without any localization. The assays were repeated 3 times, and each experiment was performed in triplicate. A representative result is shown (x1,000).

Datos de [ , , Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503 ]

Sellecks Pelitinib (EKB-569) Ha sido citado por 11 Publicaciones

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
EGFR Inhibition Potentiates FGFR Inhibitor Therapy and Overcomes Resistance in FGFR2 Fusion-Positive Cholangiocarcinoma [ Cancer Discov, 2022, 12(5):1378-1395] PubMed: 35420673
The multi-kinase inhibitor afatinib serves as a novel candidate for the treatment of human uveal melanoma [ Cell Oncol (Dordr), 2022, 45(4):601-619] PubMed: 35781872
Biomarker LEPRE1 induces pelitinib-specific drug responsiveness by regulating ABCG2 expression and tumor transition states in human leukemia and lung cancer [ Sci Rep, 2022, 12(1):2928] PubMed: 35190588
A Genome-Scale CRISPR Screen Identifies the ERBB and mTOR Signalling Networks as Key Determinants of Response to PI3K Inhibition in Pancreatic Cancer [ Mol Cancer Ther, 2020, 5;molcanther.1131.2019] PubMed: 32371585
Mapping phospho-catalytic dependencies of therapy-resistant tumours reveals actionable vulnerabilities. [ Nat Cell Biol, 2019, 21(6):778-790] PubMed: 31160710
Suppressors for Human Epidermal Growth Factor Receptor 2/4 (HER2/4): A New Family of Anti-Toxoplasmic Agents in ARPE-19 Cells [Kim YH Korean J Parasitol, 2017, 55(5):491-503] PubMed: 29103264
Sensitivity of Melanoma Cells to EGFR and FGFR Activation but Not Inhibition is Influenced by Oncogenic BRAF and NRAS Mutations. [Garay T, et al. Pathol Oncol Res, 2015, 10.1007/s12253-015-9916-9] PubMed: 25749811
Selective inhibition of human solute carrier transporters by multikinase inhibitors [Johnston RA, et al. Drug Metab Dispos, 2014, 42(11):1851-7] PubMed: 25165131
Role of epidermal growth factor receptor signaling in the interaction of Neisseria meningitidis with endothelial cells [Slanina H et al. Infect Immun, 2014, 82(3):1243-55] PubMed: 24379285

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