Palomid 529 (P529)

Palomid 529 (P529) inhibe la proliferación y aumenta la apoptosis de las células endoteliales, inhibiendo la proliferación de células endoteliales impulsada por VEGF y por bFGF con una IC50 de 20 nM y 30 nM, respectivamente. Mantiene la capacidad de inducir la apoptosis de las células endoteliales y disminuye la fosforilación de pAktS473, pGSK3βS9 y pS6 impulsada por VEGF-A. Sin embargo, este compuesto no previene la cinasa de proteína activada por mitógenos fosforilada (pMAPK) ni pAktT308 tan potentemente como pAktS473.[1] No solo reduce la respuesta proliferativa en la retina isquémica, sino que también mejora la organización y estructura de los vasos que se forman. [1] P529 muestra una potente actividad antiproliferativa en el panel de líneas celulares NCI-60, con una inhibición del crecimiento del 50 (GI50) <35 μM. Además, mejora significativamente el efecto antiproliferativo de la radiación en las células de cáncer de próstata (PC-3), dando lugar a una inhibición del crecimiento dependiente de la concentración en las células PC-3. Dosis de 2 y 7 μM resultaron en una inhibición del crecimiento del 30 y 60 %, respectivamente. Inhibe la activación de p-Akt inducida por la radiación y disminuye la relación Bcl-2/Bax en PC-3. Este compuesto no solo inhibe la sobreexpresión de Id-1 y VEGF inducida por la radiación, sino que también regula a la baja la MMP-2 y la MMP-9 inducidas por la radiación. [2]

Palomid 529 (P529) muestra una inhibición dosis-dependiente de la angiogénesis impulsada por Ad-VEGF-A después de su tratamiento. Inhibe el crecimiento tumoral de gliomas C6V10 en ratones atímicos después de la dosificación i.p. y disminuye la señalización de AktS473 pero no de AktT308. Este compuesto también inhibe el crecimiento tumoral, la angiogénesis y la permeabilidad vascular. [1] El tratamiento de ratones portadores de tumores PC-3 con este redujo el crecimiento tumoral al 57,1 % en comparación con los controles. [2] Es un supresor eficaz de la proliferación de células de Müller, la formación de cicatrices gliales y la muerte de células fotorreceptoras en un modelo de desprendimiento de retina (RD) en conejos. [3] Palomid 529 suprime significativamente el crecimiento tumoral deficiente en Brca1 en ratones mediante la inhibición de la señalización de Akt y mTOR. [4]

• Ensayos de unión al receptor de estrógenos

  Las proteínas se producen con lisados de reticulocitos de conejo. La cantidad de plantilla utilizada en cada reacción se determina empíricamente y la expresión se monitoriza en reacciones paralelas donde la [³⁵S]metionina se incorpora al receptor, seguida de electroforesis en gel y exposición a una película. Las reacciones de unión de los receptores de estrógenos (ER) y Palomid 529 (P529) se llevan a cabo en volúmenes finales de 100 μL en tampón TEG [10 mM Tris (pH 7,5), 1,5 mM EDTA, 10 % de glicerol]. Se utiliza un receptor transcrito-traducido in vitro (5 μL) en cada reacción de unión en presencia de 0,5 nM de [³H]estradiol (E2). Este compuesto se prueba rutinariamente de 10^-11 a 10^-6 M y se diluye en etanol. Las reacciones se incuban a 4 °C durante la noche y el E2 unido se cuantifica añadiendo 200 μL de carbón recubierto de dextrano. Después de una rotación de 15 minutos a 4 °C, los tubos se centrifugan durante 10 minutos y 150 μL del sobrenadante se añaden a 5 mL de mezcla de centelleo para la determinación de cpm mediante recuento por centelleo líquido. La unión máxima se determina compitiendo el E2 unido con solo el vehículo de etanol. Se incluyen controles para el fondo en cada experimento utilizando 5 μL de lisado de reticulocitos de conejo no programado. Este valor, típicamente del 10 % al 15 % de los recuentos máximos, se resta de todos los valores. Los datos se grafican y se calculan los valores de K_i. Los experimentos se realizan al menos tres veces por duplicado.

• Líneas celulares

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC)

• Concentraciones

  ~20 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC) are used. The proliferation assay is carried out by seeding the HUVECs in 96-well plates at a density of 1,000 per well in complete medium. Following a 24-hour plating period, the cells are starved for 24 hours in 0.5% serum before being treated with Palomid 529 (P529) in the presence of 10 ng/mL basic fibroblast growth factor (bFGF) or VEGF in complete medium. After 48 hours, cell number is determined using a colorimetric method. The results are expressed as the percentage of the maximal bFGF or VEGF response in the absence of this compound. Nonproliferating endothelial cells are assayed by growing HUVECs to quiescence in 96-well plates and treating with it for 48 hours. Initially, 5,000 cells per well are seeded and confluence is achieved the next day. The plates are incubated for another 24 hours to ensure growth arrest before treatment with the same compound.