PLX-4720

N.º de catálogoS1152 Lote:S115205

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Datos técnicos

Fórmula

C17H14ClF2N3O3S
Peso molecular 413.83 Número CAS 918505-84-7
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 82 mg/mL (198.14 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción PLX4720 es un inhibidor potente y selectivo de B-RafV600E con una IC50 de 13 nM en un ensayo sin células, igualmente potente que c-Raf-1 (mutaciones Y340D y Y341D), con una selectividad 10 veces mayor para B-RafV600E que para B-Raf de tipo salvaje.
Objetivos
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
In vitro PLX-4720 muestra una selectividad >10 veces mayor contra B-Raf de tipo salvaje, y una selectividad >100 veces mayor sobre otras quinasas como Frk, Src, Fak, FGFR y Aurora A con una IC50 de 1,3-3,4 μM. Este compuesto inhibe significativamente la fosforilación de ERK en líneas celulares que expresan B-RafV600E con una IC50 de 14-46 nM, pero no en las células con B-Raf de tipo salvaje. Inhibe significativamente el crecimiento de líneas celulares tumorales que expresan el oncogén B-RafV600E, como COLO205, A375, WM2664 y COLO829 con una GI50 de 0,31 μM, 0,50 μM, 1,5 μM y 1,7 μM, respectivamente. Además, este tratamiento químico a 1 μM induce la detención del ciclo celular y la apoptosis exclusivamente en las células 1205Lu B-RafV600E-positivas, pero no en las células C8161 con B-Raf de tipo salvaje. Este tratamiento con el compuesto (10 μM) induce significativamente una expresión de BIM >14 veces mayor en las células PTEN+, en comparación con las líneas celulares PTEN- (4 veces), lo que explica la resistencia de las células PTEN- a esta apoptosis inducida por químicos.
In vivo La administración oral de PLX-4720 a 20 mg/kg/día induce retrasos y regresiones significativos del crecimiento tumoral en xenoinjertos tumorales COLO205 dependientes de B-RafV600E, sin efectos adversos obvios en ratones, incluso a una dosis de 1 g/kg. Este compuesto a 100 mg/kg dos veces al día elimina casi por completo los xenoinjertos 1205Lu que expresan B-RafV600E, mientras que no tiene actividad contra los xenoinjertos C8161 que expresan B-Raf de tipo salvaje. Los efectos antitumorales de este compuesto se correlacionan con el bloqueo de la vía MAPK en aquellas células que albergan la mutación V600E. Este tratamiento químico a 30 mg/kg/día inhibe significativamente el crecimiento tumoral de los xenoinjertos 8505c en >90 %, y disminuye drásticamente las metástasis pulmonares distantes.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Actividades de la quinasa Raf in vitro

    Las actividades de la quinasa Raf de tipo salvaje y de los mutantes in vitro se determinan midiendo la fosforilación de la proteína MEK biotinilada utilizando la tecnología AlphaScreen de Perkin-Elmer. Para cada enzima (0,1 ng), se realizan reacciones de 20 μL en 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01 % Tween-20, 100 nM de proteína biotin-MEK, diversas concentraciones de ATP y concentraciones crecientes de PLX-4720 a temperatura ambiente. Las reacciones se detienen a los 2, 5, 8, 10, 20 y 30 minutos con 5 μL de una solución que contiene 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA y 0,3 % BSA. La solución de detención también incluye el anticuerpo phospho-MEK, microesferas donadoras recubiertas de estreptavidina y microesferas aceptoras de proteína A del kit de detección de proteína A AlphaScreen. El anticuerpo y las microesferas se preincuban en la solución de detención en la oscuridad a temperatura ambiente durante 30 minutos. La dilución final del anticuerpo es 1/2.000, y la concentración final de cada microesfera es 10 μg/mL. Las placas de ensayo se incuban a temperatura ambiente durante una hora y luego se leen en un lector AlphaQuest de PerkinElmer.
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • Tiempo de incubación

    24, 48, and 72 hours

  • Método

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
Estudio en animales:[1]
  • Modelos animales

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • Dosificaciones

    5, 20, or 100 mg/kg

  • Administración

    Oral gavage once or twice daily

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

Validación de productos por parte del cliente

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

Datos de [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

Datos de [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

Datos de [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

Datos de [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 Ha sido citado por 206 Publicaciones

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

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