PHA-665752

N.º de catálogoS1070 Lote:S107005

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Datos técnicos

Fórmula

C32H34Cl2N4O4S
Peso molecular 641.61 Número CAS 477575-56-7
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 128 mg/mL (199.49 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción PHA-665752 es un inhibidor potente, selectivo y ATP-competitivo de c-Met con una IC50 de 9 nM en ensayos libres de células, >50 veces más selectivo para c-Met que para RTKs o STKs.
Objetivos
c-Met
(Cell-free assay)		 RON
(Cell-free assay)		 Flk1
(Cell-free assay)
9 nM 68 nM 200 nM
In vitro PHA-665752 inhibe significativamente la actividad de la quinasa c-Met con una Ki de 4 nM, y exhibe una selectividad >50 veces mayor para c-Met en comparación con diversas tirosina quinasas y serina-treonina quinasas. Este compuesto inhibe potentemente la autofosforilación de c-Met estimulada por HGF con una IC50 de 25-50 nM. También bloquea significativamente funciones dependientes de HGF y c-Met, como la motilidad celular y la proliferación celular, con IC50 de 40-50 nM y 18-42 nM, respectivamente. Además, este químico inhibe potentemente la fosforilación constitutiva o estimulada por HGF de mediadores de la vía descendente de c-Met como Gab-1, ERK, Akt, STAT3, PLC-γ y FAK en múltiples líneas celulares tumorales. Inhibe el crecimiento celular en células BaF3 transformadas por TPR-MET con una IC50 <60 nM, e inhibe la motilidad y migración celular constitutiva en un 92,5% a 0,2 μM. La inhibición de c-Met por este compuesto (0,2 μM) también induce la apoptosis celular en un 33,1% y la detención del ciclo celular en G1, con un aumento de las células en fase G1 del 42,4% al 77,0%. Puede cooperar con rapamicina para inhibir el crecimiento de células BaF3 transformadas por TPR-MET y células H441 de cáncer de pulmón de células no pequeñas.
In vivo La administración de PHA-665752 induce una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en xenoinjertos S114 en un 20%, 39% y 68%, a dosis de 7,5, 15 y 30 mg/kg/día, respectivamente. Este tratamiento con el compuesto reduce significativamente el crecimiento tumoral de NCI-H69, NCI-H441 y A549 en xenoinjertos de ratón en un 99%, 75% y 59%, respectivamente. También inhibe significativamente la angiogénesis en más del 85%, debido a la disminución de la producción del factor de crecimiento endotelial vascular y al aumento de la producción del inhibidor de la angiogénesis trombospondina-1.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo enzimático in vitro

    La proteína de fusión GST del dominio quinasa c-Met se utiliza para el ensayo de c-Met. El valor de IC50 de PHA-665752 para la inhibición de c-Met se basa en la fosforilación de sustratos peptídicos quinasas o poli-glu-tyr en presencia de ATP y un catión divalente (MgCl2 o MnCl2 10-20 mM). El rango lineal (es decir, el período de tiempo durante el cual la tasa permanece equivalente a la tasa inicial) se determina para c-Met, y la medición cinética y la determinación de la IC50 se realizan dentro de este rango.
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    S114, GTL-16, NCI-H441, and BxPC-3

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Tiempo de incubación

    18, or 72 hours

  • Método

    For proliferation assays, cells are grown in medium with 0.1% FBS for 48 hours after which they are treated with various concentrations of PHA-665752 in HGF (50 ng/mL) in a medium containing 2% FBS. After 18 hours, cells are incubated with BrdUrd for 1 hour, fixed, and stained with anti-BrdUrd peroxidase-conjugated antibody, and plates are read at 630 nm. For apoptosis assays, cells are grown in medium with 2% FBS in presence and absence of HGF (50 ng/mL) and various concentrations of this compound for 72 hours. After 72 hours, a mixture containing ethidium bromide and acridine orange is added, and apoptotic cells (bright orange cells or cell fragments) are counted by fluorescence microscopy.
Estudio en animales:[1]
  • Modelos animales

    Female athymic mice (nu/nu) bearing S114 or GTL-16 tumor xenografts

  • Dosificaciones

    ~30 mg/kg/day

  • Administración

    Injection via bolus i.v.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14612533/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15788682/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17440059/

Validación de productos por parte del cliente

A, representative Western blot analyses of samples obtained from NSCLC cells exposed to 1 umol/L erlotinib or PHA-665,752 for 6 hours. Levels of total and phosphorylated forms of EGFR, MET, and HER3. B, representative Western blot analyses of samples obtained as described in A showing the levels of EGFR downstream signaling mediators. Protein samples obtained from untreated and treated cells were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with each antibody. Tubulin served to ensure equal loading.

Datos de [ Clin Cancer Res , 2014 , 20, 4806-15 ]

A, SCID mice bearing established HCC827/GR tumor cell xenografts were treated with each drug. The length and width of the tumors were measured at the days indicated and tumor volumes were calculated. The bars represent mean tumor volume ?SD. B, immunohistochemical staining for Ki-67 and TUNEL, as described in Materials and Methods. Quantitative data for proliferation and apoptotic indices are shown as Ki-67+ cells (left) and TUNEL+ cells (right). *, P < 0.01 and **, P < 0.001 for the combination of gefitinib plus NPS-1034 or gefitinib plus PHA-665752 versus either the control or drug alone.

Datos de [ Cancer Res , 2014 , 74, 253-62 ]

PHA-665752 increases the radiosensitivity and reverses the radioresistance induced by HGF in NPC cells. Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the c-H2AX foci. Representative immunofluorescence micrographs of the c-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x 400 magnification.

Datos de [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449(1), 49-54 ]

Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the γ-H2AX foci. (Top) Representative immunofluorescence micrographs of the γ-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x400 magnification. (Bottom) The median number of the γ-H2AX foci per cell. The bars indicate the SD. ∗P < 0.01 compared with the IR alone group.

Datos de [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449, 49-54 ]

Sellecks PHA-665752 Ha sido citado por 100 Publicaciones

Inhibition of TFF3 synergizes with c-MET inhibitors to decrease the CSC-like phenotype and metastatic burden in ER+HER2+ mammary carcinoma [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):76] PubMed: 39920140
Macrophage Subpopulation Promotes Skeletal Muscle Regeneration Through HGF/MET Signaling-Mediated Skeletal Muscle Stem Cell Proliferation [ Aging Cell, 2025, e70042.] PubMed: 40132988
Overcoming MET-targeted drug resistance in MET-amplified lung cancer by aurora kinase B inhibition [ Biochim Biophys Acta Mol Cell Res, 2025, 1872(7):120001] PubMed: 40499687
MET receptor serves as a promising target in melanoma brain metastases [ Acta Neuropathol, 2024, 147(1):44] PubMed: 38386085
LncRNA CHROMR/miR-27b-3p/MET axis promotes the proliferation, invasion, and contributes to rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma [ J Biol Chem, 2024, 300(3):105762] PubMed: 38367665
Single targeting of MET in EGFR-mutated and MET-amplified non-small cell lung cancer [ Br J Cancer, 2023, 128(12):2186-2196] PubMed: 37059804
Cancer-Associated Fibroblasts Promote Radioresistance of Breast Cancer Cells via the HGF/c-Met Signaling Pathway [ Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2023, 116(3):640-654] PubMed: 36586496
MET Receptor Tyrosine Kinase Inhibition Reduces Interferon-Gamma (IFN-γ)-Stimulated PD-L1 Expression through the STAT3 Pathway in Melanoma Cells [ Cancers (Basel), 2023, 15(13)3408] PubMed: 37444518
Cabozantinib inhibits HBV-RNA transcription by decreasing STAT3 binding to the enhancer region of cccDNA [ Hepatol Commun, 2023, 10.1097/HC9.0000000000000313] PubMed: 37938099
Dual-targeting therapy against HER3/MET in human colorectal cancers [ Cancer Med, 2023, 10.1002/cam4.5673] PubMed: 36751113

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