PD 98059

PD98059 inhibe tanto la MEK1 basal como una MEK parcialmente activada producida por la mutación de la serina en los residuos 218 y 222 a glutamato (MEK-2E) con una CI50 de 2 μM. Este compuesto no inhibe los homólogos de MAPK JNK y P38. Es altamente selectivo contra MEK, ya que no inhibe una serie de otras actividades quinasa, incluyendo la quinasa Raf, la quinasa dependiente de cAMP, la proteína quinasa C, v-Src, la quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), la quinasa del receptor de insulina, la quinasa del receptor de PDGF y la fosfatidilinositol 3-quinasa. Este inhibidor inhibe la activación de MAPK estimulada por PDGF y la incorporación de timidina en células 3T3 con una CI50 de ~10 μM y ~7 μM, respectivamente. [1] Previene potentemente la activación de MEK1 por Raf o MEK quinasa con una CI50 de 4 μM, e inhibe débilmente la activación de MEK2 por Raf con una CI50 de 50 μM. Esta sustancia química no inhibe la activación de los homólogos de MEK MKK4 y RK quinasa que participan en las cascadas de quinasas estimuladas por el estrés y la interleucina-1 en células KB y PC12, ni la activación de la p70 S6 quinasa por insulina o factor de crecimiento epidérmico en células Swiss 3T3. [2] Bloquea completamente la diferenciación de células PC12 inducida por el factor de crecimiento nervioso (NGF) sin alterar la viabilidad celular. [3] Este compuesto inhibe la proliferación de células RAW264.7 en el cultivo que contiene RANKL de manera dosis-dependiente, lo que resulta en una disminución aparente de las células TRAP-positivas. [4]

El tratamiento de ratones 30 minutos antes de la isquemia cerebral focal con PD98059 protege contra el daño, lo que resulta en una disminución del volumen del infarto. [5] El pretratamiento con este compuesto 30 minutos antes y luego junto con inyecciones horarias de ceruleína durante 3 horas mejora significativamente la pancreatitis aguda inducida por ceruleína, según el peso húmedo pancreático y la histología. [6] La administración de este químico (10 mg/kg) en ratones 1 hora después de la carragenina provoca una reducción en todos los parámetros de inflamación medidos. [7]

• Actividad inhibidora de MEK in vitro

  Se ensaya la incorporación de ³²P en la proteína básica de la mielina (MBP) en presencia de proteínas de fusión de glutatión S-transferasa (GST) que contienen la MAPK de 44 kDa (GST-MAPK) o la MEK de 45 kDa (GST-MEK1). Los ensayos se realizan en 50 μL de 50 mM Tris, pH 7.4/10 mM MgCl₂/2 mM EGTA/10 μM [γ-³²P]ATP que contienen 10 μg de GST-MEK1, 0.5 μg de GST-MAPK y 40 μg de MBP. Después de la incubación a 30°C durante 15 minutos, las reacciones se detienen mediante la adición de tampón de muestra SDS de Laemmli. La MBP fosforilada se resuelve mediante SDS/PAGE al 10%.

• Líneas celulares

  K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, and K562

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Tiempo de incubación

  3 dyas, or 7-10 days

• Método

  For monolayer growth, cells are plated into multi-well plates at 10,000-20,000/mL. Forty-eight hours later, various concentrations of PD98059 are added to the cell growth medium and incubation is continued for an additional 3 days. Cells are then removed from the wells by incubation with trypsin and enumerated with a Coulter Counter. For growth in soft agar, cells are seeded into 35-mm dishes at 5,000-10,000 cells per dish with growth medium containing 0.3% agar and desired concentrations of this compound. After 7-10 days of growth, visible colonies are manually enumerated with the aid of a dissecting microscope.

• Modelos animales

  Male Sprague–Dawley rats with acute pancreatitis

• Dosificaciones

  10 mg/kg

• Administración

  Injection i.v.