OSU-03012 (AR-12)

OSU-03012 (AR-12) induce la muerte apoptótica en células PC-3 con una IC50 de 5 µM y reduce la actividad de la p70^S6K inmunoprecipitada. Suprime completamente el crecimiento celular en una amplia gama de líneas celulares tumorales a concentraciones de 3–5 μm, en comparación con la concentración de al menos 50 μm. [1] Este compuesto promueve la muerte celular en mayor medida en células de glioma que en astrocitos no transformados. Causa una inducción dosis-dependiente de la muerte celular que no se altera por la mutación p53, la expresión de ERBB1 VIII, o la pérdida de la función de la fosfatasa y la tensina debido a una deleción homóloga en el cromosoma 10. OSU-03012 y la radiación ionizante causan una elevación aditiva e independiente de caspasas en la muerte celular. Su letalidad como agente único o cuando se combina con moduladores de señalización no se modifica en células que carecen de expresión de BIM o de BAX/BAK. Promueve la liberación de catepsina B del compartimento lisosomal y de AIF de las mitocondrias. La letalidad de este compuesto se atenúa en células con deficiencia de proteína quinasa R-like endoplasmic reticulum kinase-/-, lo que se correlacionó con la reducción de la escisión de BID y la supresión de la liberación de catepsina B y AIF en el citosol. [2] Inhibe la proliferación y migración de células de cáncer de tiroides (células NPA, WRO y ARO) e induce la apoptosis, lo que resulta en un aumento de células en fase S sin un aumento de células en G2. OSU-03012 es un inhibidor competitivo de ATP de la actividad de PAK y suprime la fosforilación de AKT en células de cáncer de tiroides. [3] Inhibe el crecimiento celular de líneas celulares de carcinoma hepatocelular, incluidas las células Huh7, Hep3B y HepG2, con valores de IC50 inferiores a 1 μM. Este compuesto no suprime la actividad de PDK1 o AKT ni induce la apoptosis celular, pero induce la autofagia en las células Huh7. Además, se detecta una acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS) después de su tratamiento. [4] Un estudio reciente muestra que podría mejorar la susceptibilidad de las líneas celulares mutantes (Bcr)-Abl a la apoptosis inducida. [5]

OSU-03012 (AR-12) suprime el crecimiento tumoral en un 57,59 % y aumenta la LC3 escindida en xenoinjertos tumorales de Huh7 a 200 mg/kg. [4] Este compuesto disminuye notablemente la expresión de la proteína EGFR en los tumores en un 48 % en comparación con los controles de vehículo y también evita que YB-1 se una al promotor de EGFR en xenoinjertos MDA-MB-435/LCC6. [6] Es bien tolerado e inhibe el crecimiento de xenoinjertos de schwannoma HMS-97 en un 55 % después de la administración oral. [7]

• Ensayo de la quinasa PDK-1

  Este ensayo in vitro se realiza utilizando un kit de ensayo de la quinasa PDK-1. Este ensayo sin células se basa en la capacidad de la PDK-1 recombinante, en presencia de vehículo DMSO o OSU-03012 (AR-12), para activar su quinasa regulada por suero y glucocorticoides corriente abajo que, a su vez, fosforila el sustrato peptídico específico de la quinasa Akt/suero y regulada por glucocorticoides RPRAATF con [γ-³²P]ATP. El sustrato peptídico ³²P-fosforilado se separa luego del [γ-³²P]-ATP residual utilizando papel de fosfocelulosa P81 y se cuantifica en un contador de centelleo después de tres lavados con ácido fosfórico al 0,75 %.

• Líneas celulares

  PC-3 cells

• Concentraciones

  0-10 μM

• Tiempo de incubación

  ~72 hours

• Método

  The effect of OSU-03012 (AR-12) on PC-3 cell viability is assessed by using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay in six replicates. Cells are grown in 10% FBS- supplemented RPMI 1640 in 96-well, flat-bottomed plates for 24 hours. They are exposed to various concentrations of this compound (0-10 μM) dissolved in DMSO (final concentration ≤0.1%) in 1% serum-containing RPMI 1640 for different time intervals (~72 hours). Controls receive DMSO vehicle at a concentration equal to that in OSU-03012-treated cells. The medium is removed and replaced by 200 μL of 0.5 mg/mL 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide in 10% FBS-containing RPMI 1640. The cells are incubated in the CO₂ incubator at 37 °C for 2 hours. Supernatants are removed from the wells, and the reduced 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide dye is solubilized in 200 μL DMSO per well. Absorbance at 570 nm is determined by using a plate reader.

• Modelos animales

  Huh7 tumor xenografts in male BALB/c nude mice

• Dosificaciones

  100-200 mg/kg

• Administración

  Daily by gavage