Nutlin-3

Nutlin-3 inhibe potentemente la interacción MDM2-p53, lo que lleva a la activación de la vía p53. Este tratamiento compuesto induce la expresión de MDM2 y p21, y muestra una potente actividad antiproliferativa con una IC50 de ~1,5 µM, solo en células con p53 de tipo salvaje como HCT116, RKO y SJSA-1, pero no en las líneas celulares mutantes de p53 SW480 y MDA-MB-435. En las células SJSA-1, este tratamiento compuesto a 10 µM durante 48 horas induce significativamente la Apoptosis celular dependiente de caspasa en aproximadamente un 45 %. Aunque también inhibe el crecimiento y la viabilidad de la piel humana (1043SK) y el embrión de ratón (NIH/3T3) con una IC50 de 2,2 µM y 1,3 µM, respectivamente, las células permanecen viables 1 semana después del tratamiento incluso a 10 µM de este químico, en contraste con las células SJSA-1 con pérdida de viabilidad a 3 µM de este tratamiento químico. [1] No induce la fosforilación de p53 en residuos clave de serina y no revela diferencias en su unión al ADN secuencia-específica y su capacidad para transactivar genes diana de p53 en comparación con la p53 fosforilada inducida por los fármacos genotóxicos doxorrubicina, lo que demuestra que la fosforilación de p53 en serinas clave es prescindible para la activación transcripcional y la Apoptosis. [2] Aunque se une menos eficientemente a MDMX que a MDM2, este compuesto puede bloquear la interacción MDMX–p53 e inducir la vía p53 en células de retinoblastoma (Weri1) con una IC50 de 0,7 µM. [3] Este químico a 30 µM también interrumpe la interacción endógena p73-HDM2 y mejora la estabilidad y las actividades proapoptóticas de p73, lo que lleva a la inhibición del crecimiento celular dependiente de la dosis y la inducción de Apoptosis en células sin p53 de tipo salvaje. [4]

La administración oral de Nutlin-3 a 200 mg/kg dos veces al día durante 3 semanas inhibe significativamente el crecimiento tumoral de los xenoinjertos SJAS-1 en un 90 %, comparable con el efecto del tratamiento con doxorrubicina con un 81 % de inhibición del crecimiento tumoral. [1]

• Estudio Biacore

  El ensayo de competición se realiza en un Biacore S51. Se utiliza un chip de sensor de la serie S CM5 para la inmovilización de un anticuerpo PentaHis para la captura de la p53 con etiqueta His. El nivel de captura es de ~200 unidades de respuesta (1 unidad de respuesta corresponde a 1 pg de proteína por mm²). La concentración de proteína MDM2 se mantiene constante en 300 nM. Nutlin-3 se disuelve en DMSO a 10 mM y se diluye aún más para hacer una serie de concentraciones de este compuesto en cada muestra de prueba de MDM2. El ensayo se realiza a 25 °C en tampón de ejecución (10 mM Hepes, 0,15 M NaCl, 2 % DMSO). La unión MDM2-p53 en presencia de este químico se calcula como un porcentaje de la unión en ausencia del mismo y se calcula la IC50.

• Líneas celulares

  HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 30 μM

• Tiempo de incubación

  8, 24, and 48 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of Nutlin-3 for 8, 24 and 48 hours. The transcriptional levels of p21 and MDM2 genes are analyzed by real-time PCR, and protein levels by western blotting. Cell viability is measured by the MTT assay. Cell apoptosis is determined by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling (TUNEL) staining with flow cytometry and fluorescence microscopy.

• Modelos animales

  Athymic female nude mice (Nu/Nu-nuBR) injected subcutaneously with SJSA-1 cells

• Dosificaciones

  200 mg/kg

• Administración

  Orally, twice a day