TAE684 (NVP-TAE684)

TAE684 (NVP-TAE684) no presenta una reactividad cruzada significativa contra otras quinasas. Este compuesto inhibe potentemente la proliferación de células Ba/F3 NPM-ALK con una IC50 de 3 nM, sin afectar la supervivencia de las células Ba/F3 incluso a 1 µM. También inhibe la proliferación de líneas celulares ALCL humanas que expresan NPM-ALK, incluyendo Karpas-299 y SU-DHL-1, con una IC50 de 2–5 nM. El modelado molecular revela que L258 puede ser uno de los principales determinantes de la selectividad de la quinasa para este químico. Su tratamiento resulta en una inhibición rápida y sostenida de la fosforilación de NPM-ALK. El compuesto induce apoptosis y detención en fase G1 en células Ba/F3 que expresan NPM-ALK y líneas celulares de pacientes con ALCL. [1] Supera notablemente la resistencia en células H3122 CR, que albergan el oncogén de fusión EML4-ALK, disminuyendo el crecimiento celular, suprimiendo la fosforilación de ALK e induciendo apoptosis.[2] El crecimiento de neuritas inducido por la expresión del mutante mALK R1279Q podría ser completamente inhibido por este compuesto a 30 nM. [3]

Después de 4 semanas de tratamiento con TAE684 (NVP-TAE684) a 3 y 10 mg/kg, hay un retraso significativo en el desarrollo del linfoma y una reducción de 100 a 1.000 veces en la señal de luminiscencia, sin signos de toxicidad relacionada con el compuesto o la enfermedad en el modelo de linfoma de Karpas-299. Este tratamiento con el compuesto también induce la regresión de la enfermedad en linfomas Karpas-299 establecidos y regula a la baja la expresión de CD30. [1] También muestra una impresionante actividad antitumoral contra tumores de xenoinjerto H3122 CR. [2] Además, el tratamiento con este químico mejora el fenotipo de ojo rugoso de ambos mutantes de ALK, especialmente el observado con ALKR1275Q. [3]

• Ensayos enzimáticos in vitro.

  Todos los ensayos enzimáticos in vitro se realizan en Upstate Biotechnology, con la excepción de InsR e IGF-1R. Para determinar el IC50 de TAE684 (NVP-TAE684) contra InsR e IGF-1R, se realiza un ensayo de fluorescencia resuelta en el tiempo homogéneo. ATP (10 mM) y 20 mg/ml de PolyEY biotinilado (Glu, Tyr 4:1) se combinan con 50 nL de diluciones seriadas de este compuesto (10-500 nM) y 4 ng de enzima InsR en presencia del tampón de reacción de la quinasa (20 mM Tris-Cl, pH 7,5/10 mM MgCl₂/3 mM MnCl₂/1 mM DTT/10 mM NaVO₄/0,1 mg/ml de BSA). Los ensayos se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente. Las reacciones se terminan añadiendo 10 mL de la solución de detección que contiene 50 mM de EDTA, 500 mM de KF, 0,5 mg/ml de BSA, 5 mg/mL de anticuerpo anti-fosfotirosina Mab PT66-K marcado con criptato de Eu3+ y 5 mg/mL de estreptavidina-XLent. La reacción se incuba durante media hora y las señales de fluorescencia se leen en Analyst GT.

• Líneas celulares

  Luciferase-expressing Karpas-299, SU-DHL-1, and Ba/F3 cells and transformed Ba/F3 stably expressing NPM-ALK, Bcr-Abl, or TEL-kinase fusion constructs.

• Concentraciones

  1 nM-10 μM

• Tiempo de incubación

  2–3 days

• Método

  Cells are seeded in 384-well plates (2.5×10⁴ cells per well) and incubated with serial dilutions of TAE684 (NVP-TAE684) or DMSO for 2–3 days. Luciferase expression is used as a measure of cell proliferation/survival and is evaluated with the Bright-Glo Luciferase Assay System. IC50 values are generated by using XLFit software.

• Modelos animales

  Karpas-299 xenografts are established in 4- to 6-week old female Fox Chase SCIDBeige mice.

• Dosificaciones

  1, 3, and 10 mg/kg

• Administración

  Once daily by oral gavage for 3 weeks