Mycophenolate mofetil

Mycophenolate mofetil es un profármaco éster del inmunosupresor activo ácido micofenólico (MPA). Este último muestra una actividad de inhibición no competitiva, selectiva y reversible contra la inosina monofosfato deshidrogenasa tipo I/II con una IC50 de 39 nM y 27 nM, respectivamente. Además, el MPA también produce la inhibición dependiente de la concentración de la proliferación de células T estimuladas por ConA, células B estimuladas por LPS y células T específicas de aloantígenos con una IC50 de 100 nM, 120 nM y 51 nM, respectivamente. [1] Este compuesto con una alta concentración de 10 μg/mL induce una fuerte apoptosis en cultivos de células microgliales y aumenta el número de células apoptóticas inmunorreactivas a la caspasa-3 activada. Además, (1 μg/mL) inhibe fuertemente la proliferación tanto de células microgliales como de astrocitos. [2] Un estudio reciente muestra que esta sustancia química atenúa significativamente la extensión de la muerte neuronal en cultivos de rebanadas hipocampales organotípicas después de una lesión neuronal de manera dependiente del tiempo. [4]

En un modelo de trasplante cardíaco heterotópico de rata ACI a Lewis, el tratamiento con Mycophenolate mofetil a dosis de 20 mg/kg y 40 mg/kg conduce a una prolongación de la supervivencia del injerto, con un tiempo medio de supervivencia (MST) de 14,5 días y 18,5 días, respectivamente. [1] En el modelo de ratón de esclerodermia inducida por bleomicina (BLM), este compuesto reduce la infiltración de células inflamatorias, el contenido de hidroxiprolina tisular y el grosor dérmico. [3]

• Actividad enzimática de IMP dehydrogenase Tipos I y II

  Las IMP dehydrogenase Tipos I y II se purifican de E. coli que expresan enzimas humanas. El ensayo se realiza utilizando una placa de 96 pocillos de fondo plano y transparente a los rayos UV. La mezcla de reacción final de 200 μL contiene 0,1 M Tris, 0,1 M KCl, 3 mM EDTA pH 8,0, 2 mM DTT y 40 nM de IMP dehydrogenase Tipo I o Tipo II. La reacción se inicia añadiendo 400 μM NAD y 400 μM IMP, seguido de una incubación a 37 °C durante 2,5 horas. La velocidad de reacción de la conversión de NAD a NADH se mide entonces basándose en el aumento de la absorbancia a 340 nm. Los ensayos también se realizan en presencia de un 50 % de suero humano para estimar la unión a proteínas séricas por diferentes inhibidores de IMP dehydrogenase.

• Líneas celulares

  ConA-stimulated T cells and LPS-stimulated B cells

• Concentraciones

  0 to 10 μM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  The spleens of male Lewis rats aged 8 weeks are aseptically removed and teased into single-cell suspensions, and the resulting splenocytes are suspended in RPMI1640 medium containing 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin, and 100 μg/mL streptomycin. Assays are performed in flat-bottomed microtiter plates, with each well containing 150000 splenocytes in a total volume of 100 μL. Splenocytes are incubated in medium containing either 1 μg/mL Concanavalin A (ConA) or lipopolysaccharide (LPS) as T or B cell mitogen, respectively, along with various concentrations of this compound at 37 °C for 48 hours in a humidified atmosphere of 5% CO₂-95% air. During the final 6 hours of incubation, cells are pulsed with 1 μCi of ³H-thymidine/well, and harvested onto pressed fiberglass in a cell harvester. The uptake of ³H-thymidine by proliferating cells is measured using a liquid scintillation counter. The in vitro immune response of alloantigen-specific T cells is evaluated as a proliferation response using one-way mixed lymphocyte reaction assay. Mesenteric lymph nodes cells from male Lewis rats aged 8 weeks and splenocytes from male ACI rats aged 8 weeks are used as responder and stimulator cells, respectively. Single-cell suspensions are prepared, and the responder cells are cultured with irradiated (20 Gy) stimulator cells in RPMI1640 supplemented with 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin, in 96-well plates (U-bottom) and in the presence of various concentrations of this compound (total volume: 200 μL, 37 °C, 5% CO₂ humidified atmosphere, 72 hours). As a negative control, responder cells are cultured with irradiated splenocytes of Lewis rats. The cell proliferation is quantified by the uptake of ³H-thymidine.

• Modelos animales

  Lewis rats with abdominal vascularized heterotopic cardiac transplantation.

• Dosificaciones

  ≤40 mg/kg

• Administración

  oral administration