Motesanib Diphosphate (AMG-706)

El Motesanib Diphosphate (AMG-706) tiene una amplia actividad contra la familia humana VEGFR y muestra una selectividad >1000 contra las quinasas EGFR, Src y p38. Inhibe significativamente la proliferación celular inducida por VEGF en HUVEC con un IC50 de 10 nM, mientras que muestra poco efecto en la proliferación inducida por bFGF con un IC50 de >3.000 nM. Este compuesto también inhibe potentemente la proliferación inducida por PDGF y la fosforilación de c-Kit inducida por SCF con IC50 de 207 nM y 37 nM, respectivamente, pero no es eficaz contra la fosforilación de EGFR inducida por EGF y la viabilidad celular de las células A431. [1] Aunque muestra poca actividad antiproliferativa en el crecimiento celular de HUVEC solas, sensibiliza significativamente las células a la radiación fraccionada. [2]

La administración de Motesanib Diphosphate (AMG-706) a 100 mg/kg inhibe significativamente la permeabilidad vascular inducida por VEGF de manera dependiente del tiempo. La administración oral de este compuesto dos veces al día o una vez al día inhibe potentemente, de manera dependiente de la dosis, la angiogénesis inducida por VEGF utilizando el modelo de córnea de rata con ED50 de 2,1 mg/kg y 4,9 mg/kg, respectivamente. Induce una regresión tumoral dependiente de la dosis de xenoinjertos A431 establecidos al dirigirse selectivamente a la neovascularización en las células tumorales. [1] Cuando se administra en combinación con radiación, muestra una actividad antitumoral significativa en modelos de xenoinjertos de carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC). [2] El tratamiento con este compuesto también induce reducciones significativas dependientes de la dosis en el crecimiento tumoral y la densidad de vasos sanguíneos de xenoinjertos MCF-7, MDA-MB-231 o Cal-51. [3]

• Ensayos de quinasa in vitro

  Las concentraciones óptimas de enzima, ATP y sustrato (péptido de gastrina) se establecen para cada enzima utilizando ensayos de fluorescencia resuelta en el tiempo homogénea (HTRF). Para Motesanib Diphosphate (AMG-706), se prueba una curva de dosis-respuesta de 10 puntos para cada enzima utilizando una concentración de ATP de dos tercios de K_m para cada una. La mayoría de los ensayos consisten en una enzima mezclada con un tampón de reacción de quinasa [20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 100 mM NaCl, 1,5 mM EGTA]. Se añade una concentración final de 1 mM DTT, 0,2 mM NaVO₄ y 20 μg/mL BSA antes de cada ensayo. Para todos los ensayos, se añaden 5,75 mg/mL de estreptavidina-aloficocianina y 0,1125 nM de Eu-PT66 inmediatamente antes de la reacción HTRF. Las placas se incuban durante 30 minutos a temperatura ambiente y se leen en un instrumento Discovery. Los valores de IC50 se calculan utilizando el algoritmo de Levenberg-Marquardt en una ecuación logística de cuatro parámetros.

• Líneas celulares

  A431, MO7e, HUVEC and NHDF cells

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Tiempo de incubación

  2 hours

• Método

  Cells are preincubated for 2 hours with different concentrations of Motesanib Diphosphate (AMG-706), and exposed with 50 ng/mL VEGF or 20 ng/mL bFGF for an additional 72 hours. After washing twice with DPBS, plates are frozen at -70 °C for 24 hours. Proliferation is assessed by the addition of CyQuant dye, and plates are read on a Victor 1420 workstation. IC50 data are calculated using the Levenberg-Marquardt algorithm into a four-parameter logistic equation.

• Modelos animales

  Female Sprague-Dawley rats with induced corneal angiogenesis, and female CD-1 nu/nu mice injected s.c. with A431 cells

• Dosificaciones

  ~100 mg/kg

• Administración

  Orally administered twice daily or once daily