Amuvatinib (MP-470)

La sal de hidrocloruro de Amuvatinib (MP-470) inhibe varias mutaciones de c-Kit, incluyendo c-Kit^D816V, c-Kit^D816H, c-Kit^V560G y c-Kit^V654A, así como un mutante de Flt3 (Flt3^D835Y) y dos mutantes de PDGFRα (PDGFRα^V561D y PDGFRα^D842V), con IC50 de 10 nM a 8,4 μM. También se une e inhibe varios mutantes de c-Kit, incluyendo c-Kit^K642E, c-Kit^D816V y c-Kit^K642E/D816V. [2] Este compuesto inhibe potentemente la proliferación de células OVCAR-3, A549, NCI-H647, DMS-153 y DMS-114, con IC50 de 0,9 μM–7,86 μM. [1] También inhibe c-Kit y PDGFRα, con valores de IC50 de 31 μM y 27 μM, respectivamente. Demuestra una potente citotoxicidad contra las células MiaPaCa-2, PANC-1 y GIST882, con IC50 de 1,6 μM a 3,0 μM. [2] En células MDA-MB-231, (1 μM) inhibe la fosforilación de tirosina de AXL. [3] En células LNCaP y PC-3, pero no en DU145, exhibe citotoxicidad con IC50 de 4 μM y 8 μM, respectivamente, e induce apoptosis a 10 μM. En células LNCaP, (10 μM) provoca una detención en G1 y disminuye la fosforilación de Akt y ERK1/2. [4] En células SF767, (10 μM) inhibe la fosforilación de c-Met y sensibiliza las células a la radiación. En combinación con la radiación, (10 μM) inhibe la actividad de la glucógeno sintasa quinasa (GSK)3β, induce apoptosis y altera la reparación de roturas de dsDNA, probablemente a través de la supresión de Rad51. [5] [6]

En modelos de xenoinjerto de ratón de células HT-29, A549 y SB-CL2, Amuvatinib (MP-470) (10 mg/kg–75 mg/kg por vía i.p. o 50 mg/kg–200 mg/kg por vía oral) inhibe el crecimiento tumoral. [1] En ratones con xenoinjertos de LNCaP, este compuesto (20 mg/kg) combinado con Erlotinib induce significativamente la inhibición del crecimiento tumoral (TGI). [4]

• Ensayo de inhibición de quinasa de c-Kit y PDGFRα

  Para la prueba de actividad inhibidora contra c-Kit y PDGFRα, las enzimas se incuban con concentraciones variables de Amuvatinib (MP-470) y γ-³²P-ATP radiomarcado. Después de 30 minutos, las mezclas de reacción se someten a electroforesis en un gel de acrilamida y se ensaya la autofosforilación, cuantificada por la cantidad de radiactividad incorporada en la enzima.

• Líneas celulares

  MiaPaCa-2, PANC-1, and GIST882 cells

• Concentraciones

  0–30 μM, dissolved in DMSO

• Tiempo de incubación

  96 hours

• Método

  Cells are plated at a density of 2 × 10³ to 1 × 10⁴ cells per well in 100 μL medium on day 0 in 96-well Falcon microtitier plates. On day 1, ten μL of serial dilutions of Amuvatinib (MP-470) are added to the plates in quadruplicates. After incubation for 4 days, the cells are fixed with 10% Trichloroacetic acid solution. Subsequently, they are labeled with 0.04% Sulforhodamine B (SRB) in 1% acetic acid. After multiple washes to remove the excess dye, 100 μL of 50 mM Tris solution is added to each well in order to dissolve the dye. The absorbance of each well is read on a plate reader at 570 nm. Date are expressed as the percentage of survival of control calculated from the absorbance corrected for background absorbance. The surviving percent of cells is determined by dividing the mean absorbance values of the monoclonal antibody by mean absorbance values of the control and multiplying by 100.

• Modelos animales

  Mice (athymic nude) xenograft models of HT-29, A549, and SB-CL2 cells

• Dosificaciones

  10 mg/kg–75 mg/kg (i.p.) or 50 mg/kg–200 mg/kg (p.o.)

• Administración

  Oral gavage (qd5 × 3 weeks) or intraperitoneal injection (qd5 × 2 weeks)