Ralimetinib (LY2228820) dimesylate

LY2228820 inhibe la p38α, así como el nivel de fosfoMAPKAPK-2 (pMK2) en células RAW 264.7, con valores de IC50 de 7 nM y 34,3 nM, respectivamente. Además, LY2228820 inhibe la formación de TNFα inducida por lipopolisacárido (LPS) en macrófagos peritoneales murinos, con una IC50 de 5,2 nM. [1] En células de mieloma múltiple (MM), incluyendo INA6, RPMI-8226, U266 y RPMI-Dox40, LY2228820 (200 nM–800 nM) bloquea significativamente la señalización de p38MAPK, como lo revela su inhibición de la fosforilación de HSP27, un objetivo corriente abajo de p38MAPK, sin afectar el nivel de expresión de HSP27. LY2228820 (200 nM–400 nM) mejora la citotoxicidad y la apoptosis, pero LY2228820 solo no inhibe el crecimiento de las células MM.1S. LY2228820 (200 nM–800 nM) también inhibe la secreción de IL-6 y MIP-1α en células estromales de médula ósea a largo plazo (LT-BMSC), células mononucleares de médula ósea (BMMNC), células CD138⁺, CD138⁻ de sangre periférica (PB) o células CD14⁺ de PB. LY2228820 (400 nM–800 nM) también bloquea la osteoclastogénesis a partir de células CD14⁺. [2]

En ratones inducidos por LPS, LY2228820 inhibe eficazmente la formación de TNFα con una dosis efectiva mínima umbral (TMED₅₀) inferior a 1 mg/kg. En un modelo de rata con artritis inducida por colágeno (CIA), LY2228820 muestra efectos potentes sobre la hinchazón de las patas, la erosión ósea y la destrucción del cartílago, con una dosis efectiva mínima umbral (TMED₅₀) de 1,5 mg/kg. [1]

• Inhibición de p38α

  La inhibición de p38α se determina utilizando p38α humana recombinante en un protocolo estándar de unión por filtro utilizando ATP[γ-³³P] y un péptido EGFR de 21 meros como sustrato. La inhibición funcional de TNFα en macrófagos peritoneales murinos se determina utilizando estimulación con LPS en presencia de LY2228820. Para evaluar la actividad de p38α en las células de manera más directa, las células RAW 264.7 se tratan con LY2228820 y luego se estimulan con anisomicina. El nivel de actividad de p38α se detecta utilizando un anticuerpo fosfoMAPKAPK-2 (pMK2) (Thr 334) que reacciona con un residuo específicamente fosforilado por p38α.

• Líneas celulares

  MM cells, including INA6, RPMI-8226, U266, and RPMI-Dox40

• Concentraciones

  200 nM–800 nM

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  MTT assays and APO 2.7 staining are performed to assess cellular proliferation and induction of apoptosis, respectively. Viability is expressed as percent viable cells. Apoptosis in cells is evaluated by APO 2.7 staining. For detection of mitochondrial membrane protein 7A6 expressed in apoptotic cells, cells are incubated with APO 2.7 reagent for 20 min. Expression of APO 2.7 is determined using an EPICS XL flow cytometer.

• Modelos animales

  Lipopolysaccharide (LPS)-induced Balb/c mice

• Dosificaciones

  0–20 mg/kg

• Administración

  Oral bid dosing for 14 days