Ispinesib (SB-715992)

Ispinesib (SB-715992) es un inhibidor potente, alostérico, reversible y específico de KSP, que cambia la propiedad de unión de KSP a los microtúbulos y altera su movimiento al inhibir la liberación de ADP sin alterar la liberación del complejo KSP-ADP del microtúbulo. [1] Este compuesto muestra una potente actividad citotóxica en un panel de líneas celulares tumorales, incluyendo Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109 y MX-1, con una IC50 de 1,2 nM a 9,5 nM. [2] En células de cáncer de próstata PC-3, (15 nM y 30 nM) bloquea la proliferación celular e induce la apoptosis regulando los niveles de expresión de genes que controlan la apoptosis, la proliferación celular, el ciclo celular y la señalización celular, como EGFR, p27, p15 e IL-11. [3] En un panel de 53 líneas celulares mamarias, Ispinesib (7,4 nM–600 nM) demuestra una amplia actividad inhibidora. En células BT-474 y MDA-MB-468, (150 nM) induce la apoptosis, como lo revela una mayor proporción de células apoptóticas, un nivel más bajo de Bcl-X_L antiapoptótico y niveles más altos de Bax y Bid proapoptóticos. [4]

Ispinesib (SB-715992) (4,5 mg/kg–15 mg/kg) exhibe efectos inhibidores contra Colo205, Colo201, HT-29, pero no contra las células MX-1, en modelos de xenoinjerto de ratón. Este compuesto (6 mg/kg–10 mg/kg) también inhibe tumores sólidos murinos, incluyendo el carcinoma pulmonar Madison 109, el sarcoma M5076, así como las leucemias L1210 y P388. [2] En modelos de xenoinjerto de ratones con células de cáncer de mama MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468 y KPL4, (8 mg/kg–10 mg/kg) inhibe el crecimiento tumoral. [4]

• Análisis Cinético en Estado Estacionario de la Actividad ATPasa de KSP Humana y su Inhibición por Ispinesib

  El análisis de la especificidad de la Kinesin se lleva a cabo utilizando un sistema de detección de piruvato quinasa-lactato deshidrogenasa que acopla la producción de ADP a la oxidación de NADH. Los cambios de absorbancia se monitorean a 340 nm. Los estudios en estado estacionario utilizando concentraciones nanomolares de KSP se realizan mediante un ensayo sensible basado en fluorescencia que utiliza un sistema de detección acoplado de piruvato quinasa, piruvato oxidasa y peroxidasa de rábano (HRP) que acopla la generación de ADP a la oxidación de Amplex Red a resorufina fluorescente. La generación de resorufina se monitorea por fluorescencia (λ_excitación = 520 nm y λ_emisión = 580 nm). Los experimentos bioquímicos en estado estacionario se realizan en tampón PEM25 [25 mM Pipes-K⁺ (pH 6,8), 2 mM MgCl₂, 1 mM EGTA] para experimentos que involucran microtúbulos. La IC50 para la inhibición en estado estacionario se determina a 500 µM ATP, 5 µM microtúbulos y 1 nM KSP en tampón PEM25. Los valores de K_{i app} (constante de disociación aparente del inhibidor) de Ispinesib (SB-715992) se extraen de las curvas de dosis-respuesta, con corrección explícita de la concentración de la enzima utilizando la ecuación de Morrison. La modalidad del inhibidor (por ejemplo, competitivo, no competitivo, acompetitivo o mixto) bajo condiciones de estado estacionario se determina midiendo el efecto de su concentración sobre la velocidad inicial en función de las concentraciones de sustrato. Los datos se ajustan utilizando ecuaciones en GraFit a ecuaciones de velocidad para los diversos modos de inhibición.

• Líneas celulares

  Breast cancer cells, including MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468, and KPL4

• Concentraciones

  0.085 nM–33 µM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  After plating cells in log phase of growth in 96-well plates and treating them with Ispinesib (SB-715992) for 72 hours, cell growth is measured using CellTiter-Glo, and luminescence is detected using BioTek FLx800. Data are analyzed and the IC50 value, defined as the drug concentration that results in 50% growth inhibition relative to control, is calculated.

• Modelos animales

  Nude (nu/nu) mice models of MCF7, KPL4, and HCC1954 cells; severe combined immunodeficient (SCID) mice model of MDA-MB-468 cells;

• Dosificaciones

  10 mg/kg for nude mice or 8 mg/kg for SCID mice

• Administración

  Intraperitoneal injection on a q4d× schedule (3 doses, every 4 day