Hesperadin

N.º de catálogoS1529 Lote:S152902

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Datos técnicos

Fórmula

C₂₉H₃₂N₄O₃S

Peso molecular

516.65

Número CAS

422513-13-1

Solubilidad (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (193.55 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.	2.500mg/ml (4.84mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to make it clear; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

Hesperadin inhibe potentemente Aurora B con un IC50 de 250 nM en un ensayo sin células. Reduce notablemente la actividad de AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 y PHK, mientras que no inhibe la actividad de MKK1 in vivo.

Objetivos

TbAUK1 (Cell-free assay)	Aurora B (human) (Cell-free assay)
40 nM	250 nM

In vitro

Hesperadin inhibe la capacidad de la Aurora B inmunoprecipitada para fosforilar la histona H3 con una IC50 de 250 nM y reduce marcadamente la actividad de otras quinasas (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 y PHK) a una concentración de 1 μM. En contraste, solo 20-100 nM de este compuesto son suficientes para inducir la pérdida de la fosforilación mitótica de la histona H3-Ser10 en células HeLa. Su tratamiento causa defectos en la mitosis y la citocinesis, lo que lleva a la detención de la proliferación de células HeLa y la poliploidización, que pueden atribuirse específicamente a la inhibición de la función de Aurora B durante el proceso de unión cromosómica. Este compuesto (100 nM) anula rápidamente el arresto mitótico inducido por taxol o monastrol, pero no por nocodazol. Su tratamiento y el tratamiento con nocodazol en células HeLa anulan la localización cinetocórica de BubR1 y disminuyen la intensidad de Bub1 en los cinetocoros, lo que sugiere que la función de Aurora B es necesaria para un reclutamiento cinetocórico eficiente de BubR1 y Bub1, lo que a su vez podría ser necesario para una señalización prolongada del punto de control. Previene la fosforilación de la histona H3 recombinante de tripanosoma por la T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) de Trypanosoma brucei patógeno con una IC50 de 40 nM en ensayos de quinasa in vitro. Este producto químico inhibe significativamente el crecimiento celular de las formas sanguíneas infecciosas cultivadas (BF) con una IC50 de 48 nM, y solo inhibe débilmente el crecimiento celular de las formas procíclicas de la etapa de insecto (PF) con una IC50 de 550 nM.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	El ensayo de la quinasa Aurora B Para el ensayo de la quinasa Aurora B, las células HeLa se lisan en un tampón que contiene 50 mM de NaCl. El extracto celular completo se centrifuga a 13.000 rpm durante 20 minutos a 4 °C utilizando una centrífuga de mesa. El sedimento obtenido de 200 mg de extracto celular completo se extrae de nuevo en 15 mL de tampón de lisis que contiene 250 mM de NaCl para obtener la quinasa Aurora B activa de la cromatina mitótica. El sobrenadante de baja velocidad de este último extracto se utiliza para la inmunoprecipitación. El anticuerpo monoclonal de ratón anti-AIM-1, o el anticuerpo de ratón anti-HA, se acopla a GammaBind Plus Sepharose, y las perlas se giran de un lado a otro en el extracto durante 90 minutos a 4 °C. Las perlas se lavan, se alicuan y se lavan en tampón de quinasa (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). El ensayo de quinasa se realiza con 10 μL de perlas en 20 μL de tampón de quinasa que contiene 5 μg de histona H3, 10 μM de ATP, 2,5 μCi de [γ-³²P]ATP y diferentes concentraciones de este compuesto durante 20 minutos a 37 °C. Se añade tampón de muestra SDS, y las muestras se hierven y se resuelven por SDS-PAGE. El gel se seca y la señal radiactiva se detecta mediante análisis de PhosphorImager. Los datos se analizan utilizando el software ImageQuant.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares HeLa cells and PtK1 cells Concentraciones Final concentration ~500 nM Tiempo de incubación 24 and 48 hours Método Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

El ensayo de la quinasa Aurora B
Para el ensayo de la quinasa Aurora B, las células HeLa se lisan en un tampón que contiene 50 mM de NaCl. El extracto celular completo se centrifuga a 13.000 rpm durante 20 minutos a 4 °C utilizando una centrífuga de mesa. El sedimento obtenido de 200 mg de extracto celular completo se extrae de nuevo en 15 mL de tampón de lisis que contiene 250 mM de NaCl para obtener la quinasa Aurora B activa de la cromatina mitótica. El sobrenadante de baja velocidad de este último extracto se utiliza para la inmunoprecipitación. El anticuerpo monoclonal de ratón anti-AIM-1, o el anticuerpo de ratón anti-HA, se acopla a GammaBind Plus Sepharose, y las perlas se giran de un lado a otro en el extracto durante 90 minutos a 4 °C. Las perlas se lavan, se alicuan y se lavan en tampón de quinasa (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF). El ensayo de quinasa se realiza con 10 μL de perlas en 20 μL de tampón de quinasa que contiene 5 μg de histona H3, 10 μM de ATP, 2,5 μCi de [γ-³²P]ATP y diferentes concentraciones de este compuesto durante 20 minutos a 37 °C. Se añade tampón de muestra SDS, y las muestras se hierven y se resuelven por SDS-PAGE. El gel se seca y la señal radiactiva se detecta mediante análisis de PhosphorImager. Los datos se analizan utilizando el software ImageQuant.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
HeLa cells and PtK1 cells
Concentraciones
Final concentration ~500 nM
Tiempo de incubación
24 and 48 hours
Método
Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12707311/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19320832/

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: Datos de [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: ,

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Hesperadin Ha sido citado por 52 Publicaciones

Homologous recombination promotes non-immunogenic mitotic cell death upon DNA damage [ Nat Cell Biol, 2025, 27(1):59-72]	PubMed: 39805921
A CPC-shelterin-BTR axis regulates mitotic telomere deprotection [ Nat Commun, 2025, 16(1):2277]	PubMed: 40097392
Identification of chemical inhibitors targeting long noncoding RNA through gene signature-based high throughput screening [ Int J Biol Macromol, 2025, 292:139119]	PubMed: 39722392
Rsk2 inhibition induces an aneuploid post-mitotic arrest of cell cycle progression in osteosarcoma cells [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):318]	PubMed: 40634321
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023]	PubMed: 40795355
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739]	PubMed: 39276350
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604]	PubMed: 38757760
Histone H3 phospho-regulation by KimH3 in both interphase and mitosis [ iScience, 2023, 26(4):106372]	PubMed: 37013187
Rsk2 and Lrp5 deficiency limit osteosarcoma growth in cFos-transgenic mice by different mechanisms [ ProQuest , 2023, 30683696]	PubMed: None
Hesperadin suppresses pancreatic cancer through ATF4/GADD45A axis at nanomolar concentrations [ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02328-4]	PubMed: 35551503

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