HA14-1

HA14-1 es una molécula pequeña y un ligando no peptídico de un bolsillo de superficie de Bcl-2 con una IC50 de aproximadamente 9 μM. Este compuesto induce la apoptosis de las células HL-60 de manera dosis-dependiente a través de la activación de caspasas. [1] Muestra efectos citotóxicos en las líneas celulares B de linfoma folicular HF1A3, HF4.9 y HF28RA con LC50 de 4.5 μM, 12.6 μM y 8.1 μM respectivamente. Este químico induce la apoptosis de las células HF1A3, HF4.9 y HF28RA a través de caspasas y ROS. [2]

El tratamiento con HA14-1 (400 nM) no tuvo ningún efecto significativo sobre el crecimiento de tumores de glioblastoma en ratones inmunodeficientes. Sin embargo, este compuesto aumenta el efecto del agente dañino para el ADN sobre el crecimiento del glioblastoma in vivo. [3]

• Determinación de la afinidad

  La afinidad de unión de compuestos orgánicos a la proteína Bcl-2 in vitro se determina mediante un ensayo de unión competitivo basado en polarización de fluorescencia. Para este ensayo, el 5-carboxifluoresceína se acopla al extremo N de un péptido, GQVGRQLAIIGDDINR, derivado del dominio BH3 de Bak (Flu-BakBH3), que ha demostrado unirse al bolsillo de superficie de la proteína Bcl-xL con alta afinidad. Según nuestros estudios de modelado molecular y medición de unión utilizando polarización de fluorescencia, el péptido Flu-BakBH3 se une al bolsillo de superficie de Bcl-2 con una afinidad similar. El Bcl-2 utilizado en este ensayo es una proteína soluble recombinante fusionada con GST. Flu-BakBH3 y la proteína Bcl-2 se mezclan en presencia o ausencia de compuestos orgánicos en condiciones de tampón estándar y se incuban durante 30 min. La unión de Flu-BakBH3 a la proteína Bcl-2 se mide en un espectrómetro de luminiscencia LS-50 equipado con polarizadores utilizando una celda de cuarzo de doble trayectoria (500 μl). El fluoróforo se excita con luz polarizada verticalmente a 480 nm (ancho de rendija de excitación 15 nm), y el valor de polarización de la luz emitida se observa a través de polarizadores verticales y horizontales a 530 nm (ancho de rendija de emisión 15 nm). La afinidad de unión de cada compuesto por la proteína Bcl-2 se evalúa determinando la capacidad de diferentes concentraciones del compuesto para inhibir la unión de Flu-BakBH3 a Bcl-2.

• Líneas celulares

  HF1A3, HF4.9 and HF28RA cells

• Concentraciones

  ~25 μM

• Tiempo de incubación

  20 h

• Método

  The cytotoxic effects of HA14-1 against different FL cell lines are determined by the MTT assay. Briefly, the cells (5000/well) are incubated in triplicate in 96-well plate in the presence or absence of this compound for 20 h at 37 °C. Thereafter, the MTT solution is added to each well. After 4 h incubation at 37 °C, the optical density (OD) is measured by means of 96-well plate reader, with the extraction buffer as a blank. The following formula is used: percentage cell viability = (OD of the experiment samples/OD of the control) × 100. Sigmoidal dose-response curves are fitted to the mean cell viability plotted against log this chemical dose and lethal concentration 50% (LC50) values are calculated from the resulting curves using Prism 4.0 softw

• Modelos animales

  Female Swiss nude mice bearing BeGBM xenografts.

• Dosificaciones

  400 nM

• Administración

  Inject at the site of cell injection.