GSK690693

GSK690693 es muy selectivo para las isoformas de Akt frente a la mayoría de las quinasas de otras familias. Sin embargo, este compuesto es menos selectivo para los miembros de la familia de quinasas AGC, incluyendo PKA, PrkX e isoenzimas PKC con IC50 de 24 nM, 5 nM y 2-21 nM, respectivamente. También inhibe potentemente AMPK y DAPK3 de la familia CAMK con IC50 de 50 nM y 81 nM, respectivamente, y PAK4, 5 y 6 de la familia STE con IC50 de 10 nM, 52 nM y 6 nM, respectivamente. Este químico inhibe la fosforilación de GSK3β en células tumorales con IC50 que oscilan entre 43 nM y 150 nM. Su tratamiento conduce a un aumento dosis-dependiente en la acumulación nuclear del factor de transcripción FOXO3A. Este compuesto inhibe potentemente la proliferación de células T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453 y LNCaP con IC50 de 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM y 147 nM, respectivamente. Su tratamiento induce apoptosis a concentraciones >100 nM tanto en células LNCaP como BT474. [1] De acuerdo con el papel de AKT en la supervivencia celular, induce apoptosis en líneas celulares ALL sensibles. [2]

Una única administración de GSK690693 inhibe la fosforilación de GSK3β en xenoinjertos de carcinoma de mama humano (BT474) de forma dosis y tiempo-dependiente. De manera similar, este compuesto induce una reducción en la fosforilación de los sustratos de Akt, PRAS40 y FKHR/FKHRL1. También resulta en un aumento agudo de la glucosa en sangre, volviendo a la línea base 8 a 10 horas después de la administración del fármaco. La administración de este químico induce reducciones en los sustratos de Akt fosforilados in vivo, e inhibe potentemente el crecimiento de xenoinjertos de carcinoma ovárico SKOV-3 humano, próstata LNCaP y mama BT474 y HCC-1954, con una inhibición máxima del 58% al 75% a la dosis de 30 mg/kg/día. [1] Este compuesto exhibe eficacia independientemente del mecanismo de activación de Akt involucrado. Es más eficaz para retrasar la progresión tumoral en ratones Lck-MyrAkt2 que expresan una forma de Akt unida a la membrana y constitutivamente activa. [3]

• Ensayos de quinasa in vitro

  Akt1, 2 o 3 de longitud completa con etiqueta His se expresan y purifican de baculovirus. La activación se lleva a cabo con PDK1 purificada para fosforilar Thr308 y MK2 purificada para fosforilar Ser473. Para medir con mayor precisión la inhibición de Akt dependiente del tiempo, las enzimas Akt activadas se incuban con GSK690693 a varias concentraciones a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de que la reacción se inicie con la adición de sustrato. La reacción final contiene 5 nM a 15 nM de enzimas Akt1, 2 y 3; 2 μM de ATP; 0,15 μCi/μL [γ-³³P]ATP; 1 μM de péptido (Biotin-aminohexanoicacid-ARKR-ERAYSFGHHA-amida); 10 mM de MgCl₂; 25 mM de MOPS (pH 7,5); 1 mM de DTT; 1 mM de CHAPS; y 50 mM de KCl. Las reacciones se incuban a temperatura ambiente durante 45 minutos, seguidas de la terminación con perlas Leadseeker en PBS que contiene EDTA (concentración final, 2 mg/mL de perlas y 75 mM de EDTA). Luego se sellan las placas, se dejan asentar las perlas durante al menos 5 horas y la formación del producto se cuantifica usando un generador de imágenes Viewlux.

• Líneas celulares

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• Modelos animales

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• Dosificaciones

  ~30 mg/kg/day

• Administración

  Administered via i.p.