GSK461364

GSK461364 inhibe la proliferación de líneas celulares cancerosas de múltiples orígenes con toxicidad mínima en células humanas no divididas. [1] El silenciamiento de ARN de p53 WT aumenta la actividad antiproliferativa de este compuesto. Dado que muchas terapias contra el cáncer tienden a ser más efectivas en pacientes con p53 WT, la mayor sensibilidad de los tumores deficientes en p53 a este químico podría ofrecer una oportunidad para tratar tumores que son refractarios a otras quimioterapias, así como una terapia de primera línea para estos genotipos. Este compuesto es una amida de tiofeno que inhibe la enzima Plk1 purificada in vitro con un K_i de 2 nM y tiene una selectividad >100 veces mayor para Plk1 en comparación con Plk2 y Plk3. Es un potente inhibidor de la proliferación celular que causa una inhibición del crecimiento del 50% (GI50) por debajo de 100 nM en la mayoría de las líneas celulares probadas con toxicidad limitada contra las células humanas no proliferantes. La inhibición de la progresión del Cell Cycle depende de la concentración, con un retraso inicial en la fase G2 a altas concentraciones de este agente y una detención en la fase M a concentraciones más bajas. Actualmente, se encuentra en un ensayo de escalada de dosis por primera vez en humanos. Las líneas celulares con mutaciones en el gen TP53 tendieron a ser más sensibles a este compuesto, y la inhibición de la respuesta p53 mediante silenciamiento de ARN confiere una mayor sensibilidad en algunas células p53 de tipo salvaje (WT). Además, estas líneas celulares más sensibles también tienen niveles aumentados de inestabilidad cromosómica, una característica asociada con las mutaciones de TP53. [2] En pruebas preclínicas, este químico muestra actividad antiproliferativa contra múltiples (>120) líneas celulares tumorales e inhibe potentemente la proliferación de más del 83% y 91% de estas líneas celulares, con valores de IC50 inferiores a 50 y 100 nM, respectivamente. [3]

La inhibición del crecimiento en cultivos celulares por GSK461364 puede ser citostática o citotóxica, pero conduce a la regresión tumoral en modelos de tumores de xenoinjerto bajo una programación de dosis adecuada. Este compuesto muestra una clara actividad antitumoral en modelos de xenoinjertos de tumores humanos. [1] Muestra una detención mitótica dosis-dependiente en xenoinjertos de ratón, lo que se correlaciona con los efectos sobre el crecimiento tumoral. [2] La administración intraperitoneal de este químico provoca la regresión o el retraso del crecimiento tumoral en diferentes modelos de xenoinjertos, incluidos los xenoinjertos de Colo205. La supresión de Plk1 in vivo mediante el uso de este agente resulta en una detención mitótica con figuras mitóticas aberrantes que consisten en husos mitóticos monopolares o colapsados. [3]

• Ensayos enzimáticos

  Las reacciones de quinasa se realizan en un volumen final de ensayo de 10 μL utilizando el kit de ensayo Z-Lyte (péptido Ser/Thr 16). Brevemente, las reacciones contienen 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.01 mg/mL caseína, 200 μM ATP, 200 μM péptido Polo Box (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH) y 6 nM Plk1 recombinante (H6-tev-PLK 1-603). Plk1 se preincubó durante 60 minutos con 0 a 1 μM GSK461364. Las reacciones se inician luego con la adición de 2 μM de péptido. Después de 15 minutos a 23 °C, las reacciones se inactivan y se procesan de acuerdo con el protocolo Z'-Lyte y se leen en un lector de placas EnVision. Los valores de fluorescencia brutos se convierten en concentración de producto formado utilizando estándares de sustrato y producto. Debido a que la potencia de inhibición de este compuesto se observa que varía en función de la concentración de ATP de una manera consistente con un modo de inhibición competitivo de ATP, se determina un límite superior para el K_i para este químico.

• Líneas celulares

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• Concentraciones

  10 nM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• Modelos animales

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• Dosificaciones

  25, 50, and 100 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)