Fedratinib (TG101348)

Fedratinib (TG101348) inhibe significativamente JAK2 V617F, Flt3 y Ret con IC50 de 3 nM, 15 nM y 48 nM, respectivamente. Este compuesto tiene una IC50 ~300 veces mayor para la JAK3 estrechamente relacionada y es un inhibidor menos potente de los miembros de la familia JAK1 y TYK2. Inhibe la proliferación de una línea celular de leucemia eritroblástica humana (HEL) que alberga la mutación JAK2V617F, así como una línea celular pro-B murina que expresa JAK2V617F humano (Ba/F3 JAK2V617F), con IC50 de 305 nM y 270 nM, respectivamente. TG-101348 también inhibe la proliferación de células Ba/F3 parentales a un nivel comparable, con IC50 de ~420 nM. Su tratamiento reduce la fosforilación de STAT5 en concentraciones que son paralelas a las concentraciones requeridas para inhibir la proliferación celular. TG101348 induce la Apoptosis en células HEL y Ba/F3 JAK2V617F de manera dosis-dependiente. No muestra actividad proapoptótica en fibroblastos dérmicos humanos normales de control a concentraciones de hasta 10 μM, y la IC50 antiproliferativa contra fibroblastos es >5 μM. [1] Este tratamiento con el compuesto disminuye la expresión de GATA-1, que se asocia con el sesgo eritroide de la diferenciación de progenitores JAK2V617F⁺, e inhibe STAT5 así como la fosforilación de GATA S310. [2] TG101348 inhibe la proliferación de células HMC-1.1 (KITV560G), con una potencia algo menor que las células HMC-1.2 (KITD816V, KITV560G), con IC50 de 740 nM y 407 nM, respectivamente. [3]

Fedratinib (TG101348) tiene el potencial de un tratamiento eficaz para las enfermedades mieloproliferativas (MPD) asociadas a JAK2V617F. En animales tratados, hay una reducción estadísticamente significativa del hematocrito y del recuento de leucocitos, una reducción/eliminación dosis-dependiente de la hematopoyesis extramedular y, al menos en algunos casos, evidencia de atenuación de la mielofibrosis, correlacionada con puntos finales sustitutos, incluyendo la reducción/eliminación de la carga de la enfermedad JAK2V617F, la supresión de la formación endógena de colonias eritroides y la inhibición in vivo de la transducción de la señal JAK-STAT. No hay toxicidades aparentes y ningún efecto sobre el número de células T. [1] La administración oral de este compuesto (120 mg/kg) inhibe significativamente la diferenciación eritroide de progenitores PV in vivo. [2]

• Ensayos de actividad quinasa sin células

  Los valores de IC50 de Fedratinib (TG101348) se determinan comercialmente utilizando el servicio de perfilado de quinasas InVitrogen para un cribado de 223 quinasas que incluía JAK2 y JAK2V617F o Carna Biosciences para el cribado de todos los miembros de la familia de quinasas Janus, incluyendo JAK1 y Tyk2. La concentración de ATP se establece aproximadamente al valor Km para cada quinasa.

• Líneas celulares

  EpoBa/F3 JAK2V617F, Ba/F3p210, HEL, and K562

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Approximately 2 × 10³ cells are plated into microtiter-plate wells in 100 μL RPMI-1640 growth media with indicated concentrations of inhibitor. Following 72 hours incubation with Fedratinib (TG101348), 50 μL of XTT dye are added to each well and incubated for 4 hours in a CO₂ incubator. The colored formazan product is measured by spectrophotometry at 450 nm with correction at 650 nm. The concentration in which 50% of the effect (i.e., inhibition of proliferation) is observed (IC50) is determined using the GraphPad Prism 4.0 software. All experiments are performed in triplicate, and the results are normalized to growth of untreated cells. Induction of apoptosis of EpoBa/F3 JAK2V617F, Ba/F3p210, HEL, and K562 cells is determined by DNA fragmentation with DMSO and increasing concentrations of this compound.

• Modelos animales

  C57BL/6 mice injected intravenously with whole bone marrow expressing JAK2V617F

• Dosificaciones

  ~120 mg/kg

• Administración

  Oral gavage twice daily (b.i.d.)