Patupilone (Epothilone B)

Patupilone (Epothilone B) muestra una mejor actividad que la Epothilone A, con una EC_0.01 de 1,8 μM. Inhibe potentemente la proliferación celular en células HCT116, con una IC50 de 0,8 nM. [1] Este compuesto induce la detención mitótica y muestra citotoxicidad en células KB3-1, KBV-1, Hela y Hs578T, con una IC50 de 3 nM a 92 nM. Compite con Taxol en la unión a los microtúbulos, con una IC50 de 3,3 μM. [2] En células MCF-7 que sobreexpresan GFP-α-tubulina, (3,5 nM) bloquea eficazmente la dinámica de los microtúbulos. Mientras tanto, induce la detención mitótica con una IC50 de 3,5 nM. [3] En células de mieloma múltiple (MM), incluyendo RPMI 8226, U266, MM.1S, LR5 y MR20, suprime directamente la proliferación con una IC50 de 1 nM a 10 nM. De manera similar, (10 nM) también induce la detención del ciclo celular y la apoptosis. [4] Un estudio reciente revela que, en células de cáncer de ovario Hey, (5 nM–100 nM) mejora el antígeno de adhesión de células epiteliales de superficie (EpCAM), sin afectar la transcripción ni el nivel celular total de EpCAM. [5]

En un modelo de xenoinjerto de ratón de células RPMI 8226, Patupilone (Epothilone B) (2,5 mg/kg–4 mg/kg) prolonga la supervivencia y suprime el crecimiento tumoral. [4] De manera similar, este compuesto a la misma dosis también inhibe el crecimiento tumoral en modelos de xenoinjerto de ratón de células de cáncer de próstata, incluyendo DU145 y PC3. [6]

• Ensayo de polimerización de tubulina

  Se purifican las proteínas de microtúbulos (MTP) de cerebro de ternera, que incluyen aproximadamente un 15%–20% de proteínas asociadas a microtúbulos. El tampón (tampón MES) utilizado para los estudios de Epothilone B-microtúbulos contiene 0,1 M de ácido 2-morfolinoetanosulfónico (MES), 1 mM de EGTA y 0,5 mM de MgCl₂ a pH 6,6. Las muestras para microscopía electrónica se colocan en rejillas recubiertas de carbono sobre Parlodion (300 mallas) y se tiñen negativamente con 2% de acetato de uranilo. El ensamblaje de microtúbulos en presencia o ausencia de Patupilone (Epothilone B) se monitoriza espectrofotométricamente utilizando un espectrofotómetro equipado con un circulador de líquido termostáticamente regulado. La temperatura se mantiene a 35 °C y los cambios en la turbidez (representativos de la masa polimérica) se monitorizan a 350 nm. La concentración efectiva (EC_0.01), definida como la concentración interpolada capaz de inducir una pendiente inicial de 0,01 DO/min, se calcula utilizando la fórmula EC_0.01 = concentración/pendiente y se expresa como la media con la desviación estándar obtenida de tres concentraciones diferentes.

• Líneas celulares

  KB3-1, KBV-1, Hela, and Hs578T cells

• Concentraciones

  0–1 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, they are treated with Patupilone (Epothilone B) and scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2/M transition and aberrant mitosis.

• Modelos animales

  Mice xenograft model of RPMI 8226 cells

• Dosificaciones

  2.5 mg/kg–4 mg/kg

• Administración

  Inject intravenously