Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669)

El tratamiento de células HT-1080 con Deforolimus induce una inhibición dosis-dependiente de la fosforilación de S6 y 4E-BP1, con IC50 de 0,2 nM y 5,6 nM, respectivamente, y conduce a una disminución del tamaño celular, un aumento en la proporción de células en la fase G1 del ciclo celular y la inhibición de la captación de glucosa. Deforolimus muestra una actividad antiproliferativa significativa en un amplio panel de líneas celulares con EC50 de 0,2-2,3 nM. Deforolimus inhibe potente y selectivamente la producción de VEGF de manera dosis-dependiente. [1] El tratamiento con Deforolimus induce significativamente la supresión del crecimiento en líneas celulares de CPNM humanas con valores de IC30 de 2,45-8,83 nM, con la excepción de H157 con IC30 de >20 nM. El tratamiento con Deforolimus (2,8-5,9 nM) desfosforila significativamente p70S6K^Thr389 en células A549, H1703 y H157, excepto H1666 que puede expresar una variante resistente de mTORC1, y provoca un aumento de la fosforilación de pAKT^ser473 y pAKT^Thr308 en células A549 y H1703. Deforolimus en combinación con los inhibidores de MEK, CI-1040 o PD0325901, exhibe un sinergismo dosis-dependiente en líneas celulares de cáncer de pulmón, que se asocia con la supresión de la proliferación en lugar de la mejora de la muerte celular, implicando la inhibición de la biogénesis ribosómica en un 40% dentro de las 24 horas y una disminución de la relación polisoma/monosoma. [2]

La administración de Deforolimus ejerce efectos antitumorales significativos en ratones portadores de xenoinjertos de PC-3 (próstata), HCT-116 (colon), MCF7 (mama), PANC-1 (páncreas) o A549 (pulmón) de manera dosis-dependiente, e inhibe la señalización mTOR en el modelo de xenoinjerto SK-LMS-1 asociado con la inhibición del crecimiento tumoral. [1]

• Inhibición del objetivo basada en células

  Las células HT-1080 se tratan con concentraciones crecientes de Deforolimus (0-100 nM) durante 2 horas, antes de la cosecha. Los lisados celulares se extraen en tampón de lisis desnaturalizante, se resuelven en SDS-PAGE y se transfieren a membranas de PVDF. Después del bloqueo, las membranas se incuban con anticuerpos primarios durante 1 hora, seguidos de anticuerpos secundarios conjugados con HRP apropiados durante 1 hora a temperatura ambiente. Las proteínas inmunorreactivas se detectan utilizando quimioluminiscencia mejorada y la autorradiografía se realiza mediante exposición a una película de rayos X. La IC50 se determina a partir de la inhibición de los niveles de proteína ribosomal S6 fosforilada (p-S6) y 4E-BP1 (p-4E-BP1).

• Líneas celulares

  Colo205, H1755, H1395, H1666, A549, H157, and H1703 cells

• Concentraciones

  Dissolved in ethanol, final concentrations ~ 1 μM

• Tiempo de incubación

  72-120 hours

• Método

  Cells are seeded at 2-3 × 10⁴/mL, and serial dilutions of Deforolimus are added after 2 hours, for at least three cell doublings (72-120 hours). Deforolimus effects are measured using the CellTiter 96 Aqueous nonradioactive cell proliferation assay and Sulforhodamine B assays. For Deforolimus, growth effects are described as IC30 because rapamycin and its derivatives do not significantly impede cell proliferation.

• Modelos animales

  Male and female athymic NCr-nu mice with xenografts established by subcutaneous implantation of PC-3, A549, HCT-116, MCF7, PANC-1 and SK-LMS-1 tumors

• Dosificaciones

  ~10 mg/kg

• Administración

  Intraperitoneally