Cyclopamine (11-Deoxojervine)

N.º de catálogoS1146 Lote:S114612

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Datos técnicos

Fórmula

C27H41NO2
Peso molecular 411.62 Número CAS 4449-51-8
Solubilidad (25°C)* In vitro Ethanol 21 mg/mL (51.01 mM)
DMSO Insoluble
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Clear solution
5%Ethanol 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 1.000mg/ml (2.43mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL 20 mg/ml clarified Ethanol stock solution to 400 μL PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL Tween80 to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 500 μL ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción La Cyclopamine (11-desoxojervina) es un antagonista específico de la vía de señalización Hedgehog (Hh) de Smoothened (Smo) con una IC50 de 46 nM en células TM3Hh12.
Objetivos
Smoothened
(TM3Hh12 cells)
46 nM
In vitro La Cyclopamine inhibe la vía de señalización Hedgehog con una IC50 de 46 nM y bloquea la actividad del receptor humano Smo expresado en células CHO-K1 en el ensayo de unión de [3H]Hh-Ag con una IC50 de 280 nM. Este compuesto inhibe significativamente la actividad de la vía Hedgehog de manera dosis-dependiente en líneas celulares tumorales derivadas del intestino que expresan ARNm de Patched (PTCH), e induce la inhibición del crecimiento de esas líneas celulares tumorales en un 75-95% a la concentración de 3 μM, pero es ineficaz contra las células tumorales de colon sin expresión de ARNm de PTCH, lo que sugiere que los efectos de este tratamiento químico están relacionados con la vía Hedgehog en lugar de ser generalmente citotóxicos. Al bloquear la señalización de Hedgehog a través de la interacción directa con Smo, (10 μM) inhibe la proliferación de las líneas celulares respondedoras a Cyclopamine SMOhigh L3.6sl y Panc 05.04 en un 75-80%, y aumenta la apoptosis de 2,5 a 3,5 veces, sin afectar la línea celular BxPC3-SMOlow. Este tratamiento disminuye significativamente el ARNm de Snail y aumenta los transcritos de E-cadherina en la línea celular E3LZ10.7. Independientemente de la inhibición del crecimiento celular, inhibe significativamente el fenotipo invasivo de las células L3.6pl dependientes de Hedgehog, causando una reducción de >500 veces en el número de células transmigrantes, pero no el de la línea celular Panc-1 independiente de Hedgehog.
In vivo La administración de Cyclopamine a una dosis de 50 mg/kg/día durante 22 días erradica los xenoinjertos de HUCCT1 en ratones sin efectos adversos obvios. Este tratamiento compuesto a una dosis de 1,2 mg durante 7 días induce una apoptosis significativa de las células tumorales y disminuye la masa tumoral en un 50-60% en los tumores derivados de Panc 05.04 y L3.6sl, respectivamente, pero no en los tumores BxPC3-SMOlow. [3] La administración de este químico solo inhibe profundamente las metástasis tumorales en xenoinjertos de E3LZ10.7 y L3.6pl, y abroga completamente las metástasis cuando se combina con gemcitabina.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo celular Hedgehog

    Este ensayo mide la etapa final de la vía de señalización de Hh, es decir, la modulación transcripcional de Gli, utilizando Luciferasa como lectura (ensayo Gli-Luc). La Cyclopamine se prepara para el ensayo mediante dilución en serie en DMSO y luego se añade a placas de ensayo vacías. Las células TM3Hh12 (células TM3 que contienen el constructo de gen reportero sensible a Hh pTA-8xGli-Luc) se resuspenden en F12 Ham's/DMEM (1:1) que contiene 5% de FBS y 15 mM de Hepes pH 7.3, se añaden a las placas de ensayo y se incuban con este compuesto durante aproximadamente 30 minutos a 37 °C en 5% de CO2. Luego se añade 1 nM de Hh-Ag 1.5 a las placas de ensayo y se incuban a 37 °C en presencia de 5% de CO2. Después de 48 horas, se añade reactivo Bright-Glo o MTS a las placas de ensayo y se determina la luminiscencia o la absorbancia a 492 nm. El valor de la IC50, definido como el punto de inflexión de la curva logística, se determina mediante regresión no lineal de la luminiscencia de la luciferasa impulsada por Gli o la señal de absorbancia del ensayo MTS frente al log10 (concentración) de este químico utilizando el paquete de software estadístico R.
Ensayo celular:[2]
  • Líneas celulares

    SEG1, OE33, KYAE, KYSE180, SNU1, AGS, SNU16, NCI-N-87, HUCCT1, PANC1, PL5, PL6, BXPC3, HS766T, KYSE150, GBD1, DLD1, and HCT116

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentration 3 μM

  • Tiempo de incubación

    4 days

  • Método

    Cells are exposed to Cyclopamine in 96-well plates. Cell viability is measured by MTS (soluble tetrazolium salt) assay. Viable cell mass is determined by optical density measurements at 490 nm (OD490) at 2 and 4 days using the CellTiter96 colorimetric assay. Relative growth is calculated as OD (day 4)﹣OD (day 2)/OD (day 2).
Estudio en animales:[2]
  • Modelos animales

    Athymic (nude) mice inoculated subcutaneously with HUCCT1 cells

  • Dosificaciones

    50 mg/kg/day

  • Administración

    Subcutaneous injection

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19091559/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520411/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520413/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17332349/

Validación de productos por parte del cliente

<p>(A)[3H]thymidine incorporation assay of B16F10 melanoma cells treated with DMSO or cyclopamine after incubation with SA-CM from WT and Cav1KO dermal fibroblasts. Representative phase-contrast images of B16F10 cells treated with SA-CM from WT and Cav1KO fibroblasts with cyclopamine are shown on the right. Similar experiments (B) were done with A-375 cells incubated with SA-CM from hTBJ1-shCtrl and hTBJ1-shCAV1 cells.</p>

Datos de [ Cancer Res , 2012 , 72, 2262-74 ]

<p>(A) The effects of cyclopamine (10 μM) in pancreatic cancer cell invasion. The number of migrated cells was quantified by counting the number of cells from 10 random fields at 200 magnification. (B) The effects of cyclopamine on the expression of EMT-related molecules E-cadherin and vimentin, and Hh pathway-related proteins SMO and Gli-1 were analyzed by Western blotting following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor cyclopamine. Normal culture was used as a negative control. (C) The EMT-related molecules Ecadherin and vimentin mRNA levels, and Hh pathway-related genes at mRNA level were analyzed by real-time RT-PCR following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor Cyclopamine. Normal culture was used as a negative control.</p>

Datos de [ Cancer Lett , 2012 , 322, 169-176 ]

<p>(A) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) for 72 hours promoted expansion of CD34+ cells and CD34- cells, cyclopamine (10 μM) for 72 hours induced apoptosis of CD34+ cells and CD34- cells, as measured by 3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay, n =4, bars, standard deviation. *Statistically significant compared with CD34+ cells. (B) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) promoted cell expansion after 48 hours and cyclopamine (10 μM) induced cell apoptosis within 24 hours measured by MTT assay (n=6).</p>

Datos de [ Exp Hematol , 2012 , 40, 418-27 ]

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of Cyclopamine by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 mM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

Sellecks Cyclopamine (11-Deoxojervine) Ha sido citado por 148 Publicaciones

The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
PlexinD1 is a driver and a therapeutic target in advanced prostate cancer [ EMBO Mol Med, 2025, 17(2):336-364] PubMed: 39748059
PPARG contributes to urothelial integrity in the murine ureter by activating the expression of Shh and superficial cell-specific genes [ Development, 2025, 152(8)dev204324] PubMed: 40167323
Interplay of SHH, WNT and BMP4 signaling regulates the development of the lamina propria in the murine ureter [ Development, 2025, 152(3)DEV204214] PubMed: 39817691
Hedgehog inhibitors exert anti-proliferation effects and synergistically interact with trastuzumab in HER2-positive gastric cancer models [ Acta Oncol, 2025, 64:715-728] PubMed: 40426308
Inhibition of PI3K and Hedgehog Signaling Pathway Inhibits Hypoxia-Induced Vasculogenic Mimicry Formation in Ovarian Cancer Stem Cells [ Balk Med J, 2025, 42(5):440-451] PubMed: 40888349
SHH Pathway Inhibition and Astrocyte Co-culture Induce Distinct Responses in Glioblastoma and Cancer Stem Cells [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-7214243] PubMed: 40894044
Proximity based proteomics reveals Git1 as a regulator of Smoothened signaling [ bioRxiv, 2025, 2025.01.06.631593] PubMed: 39829937
Foxo3-mediated physiological cell competition ensures robust tissue patterning throughout vertebrate development [ Nat Commun, 2024, 15(1):10662] PubMed: 39690179
Phosphorylation of human glioma-associated oncogene 1 on Ser937 regulates Sonic Hedgehog signaling in medulloblastoma [ Nat Commun, 2024, 15(1):987] PubMed: 38307877

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