Lexibulin (CYT997)

N.º de catálogoS2195 Lote:S219502

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Datos técnicos

Fórmula

C24H30N6O2
Peso molecular 434.53 Número CAS 917111-44-5
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 86 mg/mL (197.91 mM)
Ethanol 86 mg/mL (197.91 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 4.3mg/ml (9.90mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 86 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 0.61mg/ml (1.40mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 12.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Lexibulin (CYT997, SRI-32007) es un potente inhibidor de la polimerización de microtubule con una IC50 de 10-100 nM en líneas celulares cancerosas. Este compuesto se encuentra en Fase 2.
Objetivos
Microtubules (cancer cell lines)
10 nM-100 nM
In vitro El tratamiento con Lexibulin (CYT997) (1 μM) durante 24 horas en células A549 induce una rápida reorganización de los microtúbulos, incluyendo la destrucción de la red de microtúbulos existente y la acumulación de tubulina en placas dentro del citoplasma de algunas células, lo que lleva a alteraciones significativas de la morfología celular, incluyendo la pérdida de adhesión y el redondeo celular. Muestra una potente actividad citotóxica contra una variedad de 16 células cancerosas con IC50 que oscilan entre 9 nM para HepG2 y 101 nM para KHOS/NP. Especialmente, este compuesto exhibe una potente actividad contra las células HCT15, conocidas por poseer el mecanismo de resistencia a múltiples fármacos Pgp (MDR+), con una IC50 de 52 nM. Mediante la inhibición de la polimerización de los microtúbulos, bloquea el ciclo celular en el límite G2-M e induce un aumento de Bcl-2 fosforilado y una mayor expresión de ciclina B1, así como la activación de la caspasa-3 y la generación de poli (ADP-ribosa) polimerasa. Su tratamiento provoca un aumento rápido y reversible de la permeabilidad de los monocapas de HUVEC con una IC50 de ~80 nM a 1 hora de exposición. Consistente con la alteración de la tubulina celular, inhibe potentemente la proliferación, induce la detención del ciclo celular y, lo que es más importante, la apoptosis de las líneas celulares de mieloma humano (HMCL) y las células MM primarias.
In vivo La vida media de Lexibulin (CYT997) para administración oral (2,5 horas) en ratas es ligeramente más larga que para administración intravenosa (1,5 horas), con una biodisponibilidad oral absoluta del 50% al 70%. La administración oral de este compuesto induce una inhibición dosis-dependiente del crecimiento tumoral de xenoinjertos PC3 en ratones, más potente en comparación con el paclitaxel. También es eficaz en un modelo singénico ortotópico utilizando las células de cáncer de mama de ratón 4T1, que son algo refractarias al tratamiento con paclitaxel. Una dosis única de CYT997 (7,5 mg/kg, i.p.) reduce significativamente el flujo sanguíneo tumoral a las 6 horas en metástasis hepáticas, en una extensión similar a la del control positivo CA4P dosificado a 100 mg/kg. El tratamiento con este compuesto (15 mg/kg/día) prolonga significativamente la supervivencia en un modelo murino de mielomatosis sistémica agresiva.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[1]
  • Ensayo turbidimétrico para la polimerización de tubulina

    El efecto de Lexibulin (CYT997) en la polimerización de microtubule se determina utilizando un ensayo turbidimétrico convencional con tubulina neuronal bovina, en el que el ensamblaje de microtubule se monitorea mediante un aumento de la absorbancia a 340 nm. Se añaden concentraciones crecientes de este compuesto a 100 μL de tubulina/GTP/glicerol. Los ensayos turbidimétricos de ensamblaje de microtubule se realizan incubando proteína de microtubule bovina en cubetas a 37 °C en un espectrofotómetro termostáticamente controlado, midiendo el cambio en la absorbancia a 340 nm a lo largo del tiempo en tampón PEM [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA y 5% de glicerol].
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562

  • Concentraciones

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

  • Tiempo de incubación

    ~72 hours

  • Método

    Cells are exposed to various concentrations of Lexibulin (CYT997) for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
Estudio en animales:[1]
  • Modelos animales

    Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells

  • Dosificaciones

    ~30 mg/kg/day

  • Administración

    Oral gavage thrice a day

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19887548/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19907921/

Validación de productos por parte del cliente

<p>CYT997 inhibits cellular proliferation in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. Cell viability was measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in 96-well plates in the presence of increasing concentrations of CYT997 for 24 h.The results represent the mean ?SD of four replicates.</p>

Datos de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>CYT997 induces apoptosis in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. HL-60 cells were treated with CYT997 (0, 50, 100, and 200 nM) for 24 h, resuspended in propidium iodide (PI)-containing hypotonic buffer, and then the percentage of apoptotic cells was analyzed by flow cytometry.</p>

Datos de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Activation of caspases by CYT997. (A) Immunoblotting analysis for caspase-9, -8 and -3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP), was performed in lysates of HL-60 cells treated with CYT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. (B) Annexin V-propidium iodide (PI) staining was performed to quantify phospha- tidylserine externalization in HL-60 cells treated with CYT997 (200 nM) or untreated for 24 h, in the presence or absence of the caspase-8 inhibitor. * P<0.05.</p>

Datos de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Effects of CYT997 on the cell cycle. HL-60 cells were treated with CT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. The cell cycle was analyzed using propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry analysis.</p>

Datos de [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

Sellecks Lexibulin (CYT997) Ha sido citado por 8 Publicaciones

A modular master regulator landscape controls cancer transcriptional identity [ Cell, 2021, 184(2):334-351.e20] PubMed: 33434495
HBV Core Promoter Inhibition by Tubulin Polymerization Inhibitor (SRI-32007) [ Adv Virol, 2020, 2020:8844061] PubMed: 33110426
CYT997(Lexibulin) induces apoptosis and autophagy through the activation of mutually reinforced ER stress and ROS in osteosarcoma [ J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1):44] PubMed: 30704503
Intracellular reduction in ATP levels contributes to CYT997-induced suppression of metastasis of head and neck squamous carcinoma. [ J Cell Mol Med, 2019, 23(2):1174-1182] PubMed: 30450674
Survival of midbrain dopamine neurons depends on the Bcl2 factor Mcl1 [ Cell Death Discov, 2018, 4:107] PubMed: 30479840
Augmentation of the anticancer activity of CYT997 in human prostate cancer by inhibiting Src activity. [ J Hematol Oncol, 2017, 10(1):118] PubMed: 28606127
Structures of a diverse set of colchicine binding site inhibitors in complex with tubulin provide a rationale for drug discovery. [ FEBS J, 2016, 283(1):102-11] PubMed: 26462166
The microtubule depolymerizing agent CYT997 effectively kills acute myeloid leukemia cells via activation of caspases and inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway proteins. [XIAOHUI CHEN, et al. Exp Ther Med, 2013, 6(2):299-304] PubMed: 24137178

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