CP-466722

N.º de catálogoS2245 Lote:S224501

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Datos técnicos

Fórmula

C₁₇H₁₅N₇O₂

Peso molecular

349.35

Número CAS

1080622-86-1

Solubilidad (25°C)*

In vitro

4-Methylpyridine (calentado con baño de agua a 50 ºC)

5 mg/mL (14.31 mM)

DMSO

0.28 mg/mL (0.8 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)

Clear solution

5%4-Methylpyridine 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

0.1mg/ml (0.29mM)

Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified 4-Methylpyridine stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción

CP-466722 es un potente y reversible inhibidor de ATM, no afecta a ATR e inhibe a los miembros de la familia PI3K o PIKK en las células.

Objetivos

ATM

410 nM

In vitro

In vitro, CP-466722 se identifica como un potencial inhibidor para disminuir la actividad de la cinasa ATM purificada para fosforilar el sustrato GST-p53(1–101). Además, este compuesto también muestra actividades inhibidoras contra las cinasas abl y src. En células HeLa, este compuesto a dosis de 6 μM, resulta en la inhibición de la fosforilación dependiente de ATM al inhibir reversiblemente la actividad de la cinasa ATM inducida por radiación ionizante (IR). Además, la inducción de p53 dependiente de ATM también es inhibida por este químico en células de cáncer de mama humano MCF-7 y fibroblastos humanos diploides primarios e inmortalizados. En respuesta a IR, este compuesto aumentó la proporción de células con contenido de ADN G2/M y reduce la proporción de células con contenido de ADN en fase G1 en células HeLa. La exposición transitoria a este químico durante un período de 4 horas sensibiliza las células HeLa a IR sin afectar el recubrimiento celular ni la viabilidad celular.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:^{^[1]}	Ensayos de cinasa in vitro Para la detección de pequeños inhibidores de moléculas de la actividad de la cinasa ATM, se adapta un ensayo de cinasa in vitro y se desarrolla un ensayo ELISA que mide el estado de fosforilación de la p53, el objetivo descendente de la ATM. La GST-p53(1-101) recombinante y la ATM y ATR de longitud completa marcadas con Flag se purifican para su uso en los ensayos ELISA y en los ensayos de cinasa in vitro. Brevemente, las placas Nunc 96 pocillos Maxisorp se recubren durante la noche (4 °C) con 2 μg de GST-p53(1-101) recombinante purificada en PBS. Todas las incubaciones posteriores se realizan a temperatura ambiente. Las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS) antes de la adición de cinasa ATM recombinante purificada de longitud completa (30 ng–60 ng) en un volumen final de 80 μL de tampón de reacción (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT y 1 μM ATP) en presencia o ausencia de CP-466722. Este compuesto (10 μM) se añade a las placas por duplicado y el ensayo de cinasa se incuba (90 minutos). Las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS), se bloquean (1 hora, 1 % p/v-BSA/PBS) y se enjuagan antes de que se añada el anticuerpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) a las placas y se incube (1 hora). Para reducir la unión no específica, las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS) antes de la incubación (1 hora) con anticuerpo secundario IgG de cabra anti-conejo conjugado con HRP (1:5000/PBS). El anticuerpo secundario que está unido a la proteína GST-p53(1–101) fosforilada se detecta con el reactivo de sustrato TMB. Las placas se desarrollan (15 minutos–30 minutos) y la reacción se detiene (concentración final de 1 M H₂SO₄) antes de determinar la absorbancia (λ450nm). Este compuesto que inhibe la actividad de la cinasa ATM en los ensayos ELISA se caracteriza con respecto a la inhibición de las cinasas ATM/ATR utilizando ensayos de cinasa in vitro. Se utiliza Western blotting con el anticuerpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 como lectura de la inhibición de ATM/ATR. Upstate realiza un análisis extendido de este químico (10 μM) contra un panel de cinasas disponible comercialmente.
Ensayo celular:^{^[1]}	Líneas celulares HeLa and A-T Concentraciones 0-6 μM Tiempo de incubación 4 hours Método HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Ensayo de quinasa:^{^[1]}

Ensayos de cinasa in vitro
Para la detección de pequeños inhibidores de moléculas de la actividad de la cinasa ATM, se adapta un ensayo de cinasa in vitro y se desarrolla un ensayo ELISA que mide el estado de fosforilación de la p53, el objetivo descendente de la ATM. La GST-p53(1-101) recombinante y la ATM y ATR de longitud completa marcadas con Flag se purifican para su uso en los ensayos ELISA y en los ensayos de cinasa in vitro. Brevemente, las placas Nunc 96 pocillos Maxisorp se recubren durante la noche (4 °C) con 2 μg de GST-p53(1-101) recombinante purificada en PBS. Todas las incubaciones posteriores se realizan a temperatura ambiente. Las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS) antes de la adición de cinasa ATM recombinante purificada de longitud completa (30 ng–60 ng) en un volumen final de 80 μL de tampón de reacción (20 mM HEPES, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT y 1 μM ATP) en presencia o ausencia de CP-466722. Este compuesto (10 μM) se añade a las placas por duplicado y el ensayo de cinasa se incuba (90 minutos). Las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS), se bloquean (1 hora, 1 % p/v-BSA/PBS) y se enjuagan antes de que se añada el anticuerpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 (1:1000/PBS) a las placas y se incube (1 hora). Para reducir la unión no específica, las placas se lavan (0,05 % v/v-Tween/PBS) antes de la incubación (1 hora) con anticuerpo secundario IgG de cabra anti-conejo conjugado con HRP (1:5000/PBS). El anticuerpo secundario que está unido a la proteína GST-p53(1–101) fosforilada se detecta con el reactivo de sustrato TMB. Las placas se desarrollan (15 minutos–30 minutos) y la reacción se detiene (concentración final de 1 M H₂SO₄) antes de determinar la absorbancia (λ450nm). Este compuesto que inhibe la actividad de la cinasa ATM en los ensayos ELISA se caracteriza con respecto a la inhibición de las cinasas ATM/ATR utilizando ensayos de cinasa in vitro. Se utiliza Western blotting con el anticuerpo anti-Fosfo(Ser15)-p53 como lectura de la inhibición de ATM/ATR. Upstate realiza un análisis extendido de este químico (10 μM) contra un panel de cinasas disponible comercialmente.

Ensayo celular:^{^[1]}

Líneas celulares
HeLa and A-T
Concentraciones
0-6 μM
Tiempo de incubación
4 hours
Método
HeLa or A-T (GM02052 expressing hTERT) cells are plated in triplicate and incubated for 24 hours. Cells are pre-treated: DMSO, CP466722 or KU55933 prior to IR (0-10Gy). Cells are incubated for 4 hours following IR before media is removed, cells washed (PBS), trypsined, counted and re-plated (2000 cells/plate, 10 cm plates) in the absence of this compound and incubated for 10 days. Prior to colony counting, cells are washed (PBS), stained (PBS, 0.0037%v/v-formaldehyde, 0.1%w/v-crystal violet), rinsed (dH₂O) and dried. Defined populations (>50 cells) are counted as one surviving colony, data are calculated as percentage surviving colonies relative to control plates +/− SE.

Referencias

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18794134/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24464432/

Validación de productos por parte del cliente

: Datos de [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Datos de [ PLoS One , 2012 , 7(11), e50423 ]

: Datos de [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

: Datos de [ J Neurooncol , 2012 , 110(3), 349-57 ]

Sellecks CP-466722 Ha sido citado por 11 Publicaciones

Loss of N-Glycanase 1 Alters Transcriptional and Translational Regulation in K562 Cell Lines [ G3 (Bethesda), 2020, 4;10(5):1585-1597]	PubMed: 32265286
Gene Essentiality Profiling Reveals Gene Networks and Synthetic Lethal Interactions with Oncogenic Ras. [ Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 28162770
A Pharmacogenomic Landscape in Human Liver Cancers. [ Cancer Cell, 2019, 36(2):179-193]	PubMed: 31378681
An Anticancer Drug Cocktail of Three Kinase Inhibitors Improved Response to a Dendritic Cell-Based Cancer Vaccine [ Cancer Immunol Res, 2019, 7(9):1523-1534]	PubMed: 31266784
Upregulation of long noncoding RNA SNHG20 promotes cell growth and metastasis in esophageal squamous cell carcinoma via modulating ATM-JAK-PD-L1 pathway [ J Cell Biochem, 2019, 10.1002/jcb.28444]	PubMed: 30767270
Alleviation of Senescence via ATM Inhibition in Accelerated Aging Models. [ Mol Cells, 2019, 42(3):210-217]	PubMed: 30726661
ATM‑JAK‑PD‑L1 signaling pathway inhibition decreases EMT and metastasis of androgen‑independent prostate cancer. [ Mol Med Rep, 2018, 17(5):7045-7054]	PubMed: 29568923
Simultaneous targeting of ATM and Mcl-1 increases cisplatin sensitivity of cisplatin-resistant non-small cell lung cancer [ Cancer Biol Ther, 2017, 18(8):606-615]	PubMed: 28686074
Monitoring the Activation of the DNA Damage Response Pathway in a 3D Spheroid Model. [Mondesert O, et al. PLoS One, 2015, 10(7):e0134411]	PubMed: 26225756
ATM inhibitor KU-55933 increases the TMZ responsiveness of only inherently TMZ sensitive GBM cells. [Nadkarni A, et al. J Neurooncol, 2012, 110(3):349-57]	PubMed: 23054561

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