Canertinib (CI-1033)

Canertinib (CI-1033) muestra una excelente potencia para la inhibición irreversible de la autofosforilación de erbB2 en células MDA-MB 453, y también demuestra una alta permeabilidad en células Caco-2. [1] Este compuesto por sí solo suprime significativamente las Akt y MAP quinasas activadas constitutivamente, y en combinación inhibe Akt al tiempo que previene el aumento de los niveles de fosforilación de MAPK. Estimula la expresión de p27 y la fosforilación de p38 en células MDA-MB-453. [2] CI-1033 es altamente específico para la familia de receptores erbB y no es sensible a PGFR, FGFR o IR incluso a 50 μM. Muestra altos niveles de inhibición en células A431 que expresan EGFR con una IC50 de 7,4 nM, y suprime la fosforilación de tirosina de erbB2, erbB3 y erbB4 estimulada por heregulina con IC50 de 5, 14 y 10 nM, respectivamente. El compuesto también inhibe la expresión de pp62^c-fos en respuesta a la heregulina. [3] Se predice que modifica covalentemente Cys773 dentro del sitio de unión de ATP de la quinasa HER2 y mejora la destrucción de moléculas ErbB-2 tanto maduras como inmaduras. [4] Este compuesto induce una disminución significativa en la fosforilación medible de los residuos de tirosina 845 y 1068 de EGFR, que son responsables de la señalización de Src y Ras/MAPK respectivamente. Los residuos correspondientes de Her-2, los residuos de tirosina 877 y 1248 se desfosforilan significativamente por este a una concentración de 3 μM o superior. CI podría bloquear la internalización de EGFR y aumentar la tasa de apoptosis en células de osteosarcoma primarias de forma titulable. [5] Además, inhibe la proliferación de células TT, TE2, TE6 y TE10 significativamente a 0,1 nM. [6]

Canertinib (CI-1033) muestra una actividad impresionante contra xenoinjertos A431 en ratones desnudos a 5 mg/kg de peso corporal. [1] Este compuesto (20 a 80 mg/kg/día) logra un alto grado de regresiones tumorales en modelos de xenoinjertos H125. [3] Su administración oral provoca una marcada inhibición del crecimiento en xenoinjertos TT, TE6 y TE10 en ratones desnudos, sin muerte animal y con <10% de pérdida de peso. [6]

• Tyrosine Kinase Assays

  Los ensayos enzimáticos para la determinación de la IC50 se realizan en placas de filtro de 96 pocillos en un volumen total de 0,1 mL, que contienen 20 mM de Hepes, pH 7,4, 50 mM de vanadato de sodio, 10 μM de ATP que contiene 0,5 mCi de [³²P]ATP, 20 mg de ácido poliglutámico/tirosina, 10 ng de EGFR tyrosine kinase, y diluciones apropiadas de Canertinib (CI-1033). Todos los componentes excepto el ATP se añaden al pocillo y la placa se incuba con agitación durante 10 min a 25 °C. La reacción se inicia añadiendo [³²P]ATP, y la placa se incuba a 25 °C durante otros 10 min. La reacción se termina añadiendo 0,1 mL de ácido tricloroacético (TCA) al 20%. La placa se mantiene a 4 °C durante al menos 15 min para permitir que el sustrato precipite. Los pocillos se lavan cinco veces con 0,2 mL de TCA al 10% y la incorporación de 32P se determina con un contador de placas Wallac β.

• Líneas celulares

  TT, TE2, TE6 and TE10 cells

• Concentraciones

  0.1-5.0 nM

• Tiempo de incubación

  1, 3, 5 and 7 days

• Método

  Cells (1 × 10⁴) are seeded in each well of a 24-well plastic culture plate and left overnight in DMEM or RPMI-1640 supplemented with 10% FBS. The next morning, the cells are treated with the indicated concentrations of Canertinib (CI-1033) (0.1-5.0 nM) for varying periods (1, 3, 5 and 7 days). After treatment, the cells are counted using a Coulter counter. The percent of cell proliferation is calculated by this formula: treatment cell number/control cell number × 100 for each time period.

• Modelos animales

  A431 xenografts established in nude mice

• Dosificaciones

  ~18 mg/kg

• Administración

  Administered orally