SKI-606 (Bosutinib)

Bosutinib es selectivo para Src sobre las quinasas no pertenecientes a la familia Src con una IC50 de 1,2 nM, e inhibe potentemente la proliferación celular dependiente de Src con una IC50 de 100 nM. [1] Este compuesto inhibe significativamente la proliferación de las líneas celulares de leucemia Bcr-Abl-positivas KU812, K562 y MEG-01, pero no de Molt-4, HL-60, Ramos y otras líneas celulares de leucemia, con IC50 de 5 nM, 20 nM y 20 nM, respectivamente, más potentemente que la de STI-571. Similar a STI-571, muestra actividad antiproliferativa contra los fibroblastos transformados por Abl-MLV con una IC50 de 90 nM. Este químico anula la fosforilación de tirosina de Bcr-Abl y STAT5 en células de LMC y de v-Abl expresado en fibroblastos a una concentración de ~50 nM, 10-25 nM y 200 nM, respectivamente, lo que conduce a la inhibición de la señalización descendente de Bcr-Abl de la fosforilación de Lyn/Hck. [2] Aunque es incapaz de inhibir la proliferación y supervivencia de las células de cáncer de mama, disminuye significativamente la motilidad e invasión de las células de cáncer de mama con una IC50 de ~250 nM, lo que implica un aumento de la adhesión célula-célula y la localización en la membrana de la β-catenina. [3]

Bosutinib (60 mg/kg/día) es activo contra xenoinjertos de fibroblastos transformados por Src y xenoinjertos HT29 en ratones desnudos con T/C de 18% y 30%, respectivamente. [1] La administración oral de este compuesto durante 5 días suprime significativamente el crecimiento tumoral K562 en ratones de manera dosis-dependiente, con los tumores grandes erradicados a una dosis de 100 mg/kg y sin tumores a 150 mg/kg sin toxicidad manifiesta. [2] Al ser inactivo contra xenoinjertos Colo205 en ratones desnudos a 50 mg/kg dos veces al día, la dosificación de este químico a 75 mg/kg dos veces al día es necesaria contra xenoinjertos Colo205, y el aumento de la dosis de este compuesto no tiene beneficio adicional, en contraste con la capacidad dosis-dependiente significativa contra xenoinjertos HT29. [4]

• Los ensayos de quinasas Src y Abl

  La actividad de la quinasa Src se mide en formato ELISA. Src (3 unidades/reacción), tampón de reacción (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM EGTA, 0,5 mM Na₃VO₄) y el péptido sustrato cdc2 se añaden a varias concentraciones de Bosutinib y se incuban a 30 °C durante 10 minutos. La reacción se inicia con la adición de ATP a una concentración final de 100 μM, se incuba a 30 °C durante 1 hora y se detiene con la adición de EDTA. Se siguen las instrucciones del fabricante para los pasos posteriores. El ensayo de la quinasa Abl se realiza en un formato de ensayo de detección basado en europio en fase sólida DELFIA. El péptido biotinilado (2 μM) se une a placas de microtitulación recubiertas de estreptavidina durante 1,5 horas en 1 mg/mL de ovoalbúmina en PBS. Las placas se lavan durante 1 hora con PBS/0,1% Tween 80, seguido de un lavado con PBS. La reacción de la quinasa se incuba durante 1 hora a 30°C. La quinasa Abl (10 unidades) se mezcla con 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 80 μM EGTA, 100 μM ATP, 0,5 mM Na₃VO₄, 1% DMSO, 1 mM HEPES (pH 7,0), 200 μg/mL de ovoalbúmina y varias concentraciones de este compuesto. La reacción se detiene con EDTA a una concentración final de 50 mM. La reacción se monitoriza con anticuerpo antifosfotirosina marcado con Eu y solución de mejora DELFIA.

• Líneas celulares

  Abl-MLV, Rat 2, KU812, K562, and MEG-01 cells

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  Cells are exposed to various concentrations of Bosutinib for 72 hours. Anchorage-independent proliferation of Abl-MLV-transformed fibroblasts is measured in 96-well ultra-low binding plates treated with Sigmacote to block residual cell attachment. Cell proliferation is measured with MTS or Cell-Glo. For the determination of cell cycle or cell death, cells are prepared for FACS analysis in the CycleTest Plus DNA reagent kit and analyzed on a fluorescence-activated cell sorter flow cytometer.

• Modelos animales

  Nude female mice injected with K562 cells

• Dosificaciones

  ~150 mg/kg/day

• Administración

  Oral gavage