Daclatasvir (BMS-790052)

N.º de catálogoS1482 Lote:S148203

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Datos técnicos

Fórmula

C40H50N8O6
Peso molecular 738.88 Número CAS 1009119-64-5
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción Daclatasvir (BMS-790052, EBP883) es un inhibidor altamente selectivo de HCV NS5A con una EC50 de 9-50 pM, para un amplio rango de genotipos de replicón de VHC y el virus infeccioso JFH-1 genotipo 2a en cultivo celular. Fase 3.
Objetivos
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
In vitro Daclatasvir (BMS-790052) es uno de los inhibidores más potentes de la replicación del VHC reportados hasta ahora. Los valores medios de EC50 de este compuesto son 50 y 9 pM para los replicones de VHC genotipo 1a y 1b, respectivamente. Muestra un índice terapéutico (CC50/EC50) de al menos 105 y es inactivo frente a un panel de 10 virus de ARN y ADN, con una EC50 superior a 10 μM. Esto confirma su especificidad para el VHC. En células Huh7 que albergan los replicones de VHC genotipo 1b, bloquea la replicación del genoma del VHC, tanto transitoria como estable, con valores de EC50 que van de 1 a 15 pM. A concentraciones de 100 pM o 1 nM, se ha demostrado que altera la localización subcelular y el fraccionamiento bioquímico de NS5A. Este compuesto inhibe los replicones híbridos que contienen genes NS5A del genotipo 4 del VHC con una EC50 de 7-13 pM. El residuo 30 de NS5A es un sitio importante para la resistencia mediada por BMS-790052 en los replicones híbridos.
Características Inhibidor de primera clase, altamente selectivo de la NS5A del virus de la hepatitis C (VHC) con valores de EC50 picomolares.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:[4]
  • Ensayo FRET para inhibidores de HCV NS5A

    Este péptido (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2) contiene un donante fluorescente {EDANS, ácido 5-[(2-aminoetil)amino]naftaleno-1-sulfónico} cerca de un extremo y un aceptor {DABCYL, ácido 4-[(4-dimetilamino)fenil]azo}benzoico} cerca del otro extremo. La transferencia de energía de resonancia intermolecular entre el donante y el aceptor extingue la fluorescencia del péptido, pero a medida que la Protease NS3 escinde el péptido, los productos se liberan de la extinción por transferencia de energía de resonancia. La fluorescencia del donante aumenta con el tiempo a medida que se escinde más sustrato por la Protease NS3. Los reactivos de detección son: reactivo de lisis de cultivo celular de luciferasa 5× diluido con dH2O a 1×, con NaCl (150 mM) y péptido FRET (20 μM) añadidos. Las células HCV-Huh-7 se colocaron en placas de 96 pocillos y se dejaron adherir durante la noche (1×104 células por pocillo). Al día siguiente, se añadió Daclatasvir (BMS-790052) a los pocillos y las placas se incubaron durante 72 horas. Luego, las placas se enjuagaron con PBS y se realizó el ensayo FRET añadiendo 30 μL del reactivo de detección del péptido FRET antes mencionado a cada pocillo. Las señales se adquirieron utilizando un instrumento Cytofluor 4000, configurado en modo automático de 340 nm (excitación)/490 nm (emisión), ejecutado durante 20 ciclos o menos, y leyendo las placas en modo cinético. Después del ensayo FRET, se añadieron 40 μL de sustrato de luciferasa a cada pocillo y se midió la actividad de la luciferasa.
Ensayo celular:[1]
  • Líneas celulares

    HCV replicon cells (Huh7)

  • Concentraciones

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • Tiempo de incubación

    72 hours

  • Método

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

Validación de productos por parte del cliente

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

Datos de [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) Ha sido citado por 58 Publicaciones

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

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