BMS-777607

BMS-777607 es un inhibidor selectivo de la quinasa Met, competitivo de ATP, que bloquea potentemente la autofosforilación de c-Met con una IC50 de 20 nM en lisados celulares GTL-16, y demuestra una inhibición selectiva de la proliferación en líneas celulares tumorales impulsadas por Met, como la línea celular GTL-16, H1993 y U87. [1] Este compuesto inhibe la autofosforilación de c-Met desencadenada por el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) con una IC50 de <1 nM en células de cáncer de próstata PC-3 y DU145. Este compuesto tiene poco efecto sobre el crecimiento de las células tumorales, pero exhibe un efecto inhibidor sobre la dispersión celular inducida por HGF en células PC-3 y DU145, con una inhibición casi completa a 0,5 μM. También suprime la migración e invasión celular estimuladas de forma dosis-dependiente (IC50 < 0,1 μM) en ambas líneas celulares. [2] La aplicación de este compuesto (~10 μM) a las células murinas KHT altamente metastásicas durante 2 horas elimina potentemente los niveles basales de c-Met autofosforilado con una IC50 de 10 nM sin afectar el c-Met total, lo que lleva a una inhibición dosis-dependiente de la fosforilación de moléculas de señalización corriente abajo, incluyendo ERK, Akt, p70S6K y S6. El tratamiento con este compuesto (~1 μM) durante 24 horas inhibe potentemente la dispersión, motilidad e invasión de células KHT en dosis en el rango nanomolar, lo que concuerda con la "reducción" del gen MET, y afecta modestamente la proliferación celular y la formación de colonias. [3]

La administración oral de BMS 777607 (6,25-50 mg/kg) reduce significativamente los volúmenes tumorales de los xenoinjertos tumorales humanos GTL-16 en ratones atímicos sin toxicidad observada. [1] La administración de este compuesto (25 mg/kg/día) disminuye el número de nódulos tumorales pulmonares KHT (28,3 %), mejora la hemorragia morfológica y altera significativamente el fenotipo metastásico en ratones C3H/HeJ hembras de 6 a 8 semanas de edad inyectadas con células de fibrosarcoma de roedor KHT sin toxicidad sistémica aparente en comparación con el tratamiento de control. Una dosis baja de este químico (10 mg/kg) también ofrece una inhibición leve pero no significativa de la formación de nódulos pulmonares en comparación con el control del vehículo. [3]

• Ensayo de la quinasa Met

  La reacción de la quinasa consiste en GST-Met expresada en baculovirus, 3 μg de poli(Glu/Tyr), 0,12 μCi de ³³P γ-ATP, 1 μM de ATP en 30 μL de tampón de quinasa (20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0,1 mg/mL BSA, 0,5 mM DTT). Las reacciones se incuban durante 1 hora a 30 °C y se detienen con la adición de ácido tricloroacético (TCA) frío a una concentración final del 8 %. Los precipitados de TCA se recogen en placas unifiltro GF/C utilizando un recolector universal Filtermate, y los filtros se cuantifican utilizando un contador de centelleo líquido de 96 pocillos TopCount. Se generan curvas de dosis-respuesta para determinar la concentración necesaria para inhibir el 50 % de la fosforilación del sustrato (IC50). Este compuesto se disuelve a 10 mM en DMSO y se evalúa a 10 concentraciones, por duplicado.

• Líneas celulares

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• Tiempo de incubación

  2, 24 and 96 hours

• Método

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• Modelos animales

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• Dosificaciones

  10-25 mg/kg.

• Administración

  Oral gavage once daily.