Avasimibe

Avasimibe, a una concentración de 1 μg/mL, provoca una reducción del colesterol total (TC) y del colesterol esterificado (EC) al inhibir la unión del LDL y disminuir el número de receptores depuradores durante la formación de células espumosas en macrófagos derivados de monocitos humanos (HMMs). Este compuesto, a una concentración de 2 μg/mL, mejora el eflujo de colesterol de las células espumosas HMM establecidas preincubadas con 10 μg/ml de LDL. [1] Inhibe la acumulación de Lipoproteína(a) en los medios de cultivo de hepatocitos primarios de mono de manera dosis-dependiente con una inhibición del 11,9% al 31,3%, el cambio se asocia principalmente con una disminución de ApoA. [2] Esta sustancia química, incubada a concentraciones de 10 nM, 1 μM y 10 μM durante 24 horas en células HepG2, reduce la secreción de ApoB en los medios en un 25%, 27% y 43%, respectivamente. Disminuye la secreción de ApoB mediante una degradación intracelular mejorada de ApoB en lugar de una síntesis disminuida de ApoB. [3] El compuesto inhibe la ACTC con una IC50 de 3,3 μM en macrófagos IC-21, considerando la concentración total del inhibidor en la muestra del ensayo. [4] Inhibe las isoenzimas humanas P450 CYP2C9, CYP1A2 y CYP2C19 con una IC50 de 2,9 μM, 13,9 μM y 26,5 μM, respectivamente. [5] Este inhibidor inhibe la expresión de ACAT-1 y la síntesis de ésteres de colesterol en líneas celulares de glioma. Inhibe el crecimiento de las células de glioma induciendo la detención del ciclo celular y la apoptosis debido a la activación de la caspasa-8 y la caspasa-3. [6]

Avasimibe reduce significativamente los niveles de Lipoproteína(a) y de colesterol total en nueve monos macho sanos con una dieta de chow normal tratados oralmente con CI-1011 a 30 mg/kg por día durante 3 semanas; los niveles de Lipoproteína(a) y de colesterol total se reducen a 68 y 73% de los niveles de control, respectivamente. Este compuesto disminuye el colesterol total principalmente debido a la reducción de lipoproteínas de baja densidad (LDL). [2] Disminuye la carga de placas amiloides en la corteza y el hipocampo y reduce los niveles de Abeta40 y Abeta42 insolubles y de fragmentos C-terminales de la proteína precursora amiloide (APP) en extractos cerebrales en ratones transgénicos APP humanos jóvenes. Este producto químico reduce las placas amiloides difusas mediante la supresión de la astrogliosis y la activación microglial mejorada en ratones transgénicos APP humanos envejecidos. [7]

• Estudios de inhibición de P450

  Para todos los ensayos de inhibición se utilizan microsomas hepáticos humanos (HLM) agrupados de al menos 15 donantes. Para las determinaciones de IC50, las sondas de sustrato se utilizan a sus valores de Km in vitro aproximados. Todas las incubaciones se realizan con 100 mM de tampón de fosfato de potasio (pH 7,4) y 1 mM de NADPH. Para el estudio de inhibición de CYP1A2, las incubaciones se realizan en un volumen total de 0,5 ml, por duplicado con 0,1 mg/ml de HLM, 30 μM de fenacetina, 1 mM de NADPH, y en presencia de este compuesto (0, 0,3, 0,75, 1,5, 3, 7,5, 15, 30 y 40 μM en 50 mM) en un tampón de fosfato de potasio a pH 7,4. Después de la preincubación a 37 °C durante 7 min, se añade NADPH para iniciar la reacción enzimática. La mezcla de reacción se interrumpe con 500 μl de paracetamol-D₄/CH₃CN frío a 100 ng/ml después de 25 min. Los estándares (4-acetamidofenol, singlete) y los controles de calidad (triplicados para bajo, medio y alto) se preparan a temperatura ambiente. Después de mezclar, 0,2 ml de las muestras se transfieren a otra placa y se someten a análisis LC/MS/MS después de centrifugación a 3000 rpm durante 10 min. Se utiliza una columna Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2,1 mm (tamaño de partícula de 5 μm) (Supelco, Bellefonte, PA). La fase móvil es isocrática, 40:60 [acetonitrilo/ácido fórmico, 0,1 % (v/v)] a 0,2 ml/min.

• Líneas celulares

  primary human monocyte-derived macrophages

• Concentraciones

  1 μg/mL or 2 μg/mL

• Tiempo de incubación

  48 hours

• Método

  For foam cell formation, the growth medium (RPMI medium containing 10% human serum) is aspirated and the BMMs are rinsed four times with RPMI medium, and then HMMs are exposed to RPMI medium containing bovine serum albumin (BSA, 0.2%) and (DMSO, 0.2%, vehicle for CI-1011) (control medium) with and without agacLDL (100 μg protein/ml) and this compound (1 μg/ml) for 48 hours. For cholesterol efflux experiments, HMMs are preincubated with ag-acLDL (100 μg protein/ml) for 24h, and then exposed to control RPMI medium with and without HDL (100 μg protein/ml), this compound (2 μg/ml) or HDL plus this compound (2 μg/ml) for 24–48 hours. Additionally, the appearance of [¹⁴C]FC in the medium is monitored by first preincubating HMMs with RPMI medium containing ag-acLDL (100 μg protein/ml) radiolabeled with [4-¹⁴C]FC (0.5 μCi/ml) in an ethanolic spritz (final concentration, 0.1%) for 24 h. The medium is removed, cells rinsed three times with RPMI medium, and then cells are exposed to control RPMI medium with and without this compound (1–10 μg/ml) for 4–48 h. At each time point, the medium is aspirated and centrifuged to pellet nonadherent cells. The appearance of [¹⁴C]FC in the medium is measured by liquid scintillation spectroscopy. Cellular lipids are extracted using hexane:isopropanol (3:2, v/v) for 1 h. The distribution of cellular radiolabeled cholesterol is measured by subjecting an aliquot of the cell extract and FC and EC standards to thin layer chromatography using petroleum ether:hexane:glacial acetic acid solvent system (85:15:2, v/v). The percent FC efflux is calculated as: medium [¹⁴C]FC dpm/ cell [¹⁴C] dpm×100. FC and TC mass are quantified by gas liquid chromatography using stigmasterol (1 mg/ml) as an internal standard. EC mass is calculated as the difference between TC and FC, and all values are normalized to cell protein. The MBC is defined as the lowest concentration that exhibited 99.9% or more reduction of the numbers of colonies compared with the cfu in the initial inoculum.

• Modelos animales

  male cynomolgus monkeys

• Dosificaciones

  30 mg/kg

• Administración

  Orally at a single dose per day for 3 weeks