Atazanavir (BMS-232632) Sulfate

Atazanavir inhibe el clivaje proteolítico de la poliproteína p55 precursora viral gag con una IC50 de ~47 nM en células H9 infectadas con el virus. Atazanavir exhibe una potente actividad antiviral con una EC50 de 3,89 nM en cepas RF/MT-2. [1]. Se ha demostrado que Atazanavir es un inhibidor de la glucuronidación de la bilirrubina con una IC50 de 2,4 μM. Atazanavir inhibe la UGT1A1 recombinante con un Ki de 1,9 μM. [2] Atazanavir inhibe el crecimiento celular en las líneas celulares de glioblastoma U251, T98G y LN229, con un aumento sorprendente de los niveles de proteínas GRP78 y CHOP. Atazanavir provoca un aumento prominente de proteínas poliubiquitinadas de varios tamaños diferentes en las células de glioblastoma U251. [3] Atazanavir también inhibe el proteasoma humano 20S con una IC50 de 26 μM. Atazanavir (30 μM) cambia las magnitudes del estrés del RE y la expresión génica de UPR en células HepG2. [4] Atazanavir (30 mM) causa un aumento de 2,5 veces en la expresión de P-gp inmunorreactiva con una disminución de Rh123 intracelular en células LS180V. [5]

• Ensayos de Protease

  Para determinar las constantes de inhibición (Ki) para cada inhibidor de Prt, la Prt de tipo salvaje HIV-1 RF purificada (2,5 nM) se incuba a 37 ℃ con 1 μM a 15 μM de sustrato fluorogénico en tampón de reacción (1 M NaCl, 1 mM EDTA, 0,1 M acetato de sodio [pH 5,5], 0,1% polietilenglicol 8000) en presencia o ausencia de Atazanavir. La escisión del sustrato se cuantifica midiendo un aumento en la emisión fluorescente a 490 nM después de la excitación a 340 nM utilizando un Cytofluor 4000. Las reacciones se realizan utilizando 1,36 μM, 1,66 μM, 2,1 μM, 3,0 μM, 5,0 μM o 15 μM de sustrato en presencia de cinco concentraciones de Atazanavir (1,25 nM a 25 nM). La escisión del sustrato se monitoriza a intervalos de 5 minutos durante 30 minutos. Las tasas de escisión se determinan luego para cada muestra en los primeros puntos de tiempo de la reacción, y los valores de Ki se determinan a partir de las pendientes de las curvas de Michaelis-Menten resultantes.

• Líneas celulares

  RF/MT-2 strains

• Concentraciones

  15 nM

• Tiempo de incubación

  6 days

• Método

  To determine cytotoxicity, host cells are incubated in the presence of serially diluted Atazanavir for 6 days and cell viability is quantitated using an XTT[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] assay to calculate the 50% cytotoxic concentrations (CC50s). To assess the effect of human serum proteins on antiviral activity, the 10% fetal calf serum normally used for assays is replaced with 40% adult human serum or 1 mg of α1-acid glycoprotein/mL.